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夏沐浅

新虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE结果求分析原因

跑的是marker蛋白，12%的分离胶，没有浓缩胶，跑着呈倒梯形，而且一共有十种蛋白的，我的出来了8条，15mA的电流，电压开始只有60V，而且83*73*1的胶跑了1：40，时间也这么长，这个是怎么回事啊？
上面的图是考染之后的，下面的是跑完之后拍的，
SDS-PAGE结果求分析原因
SDS-PAGE自制胶 zlp 2013-06-06.jpg


SDS-PAGE结果求分析原因-1
P6069319.JPG
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清浅
1楼 2013-06-07 15:52:24
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rv1nm2y

银虫 (小有名气)
★ ★
137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-06-25 11:28:33
引用回帖:
19楼: Originally posted by 夏沐浅 at 2013-06-25 09:53:23
我做了好多次了···
我也觉得是胶的问题，就是还没找到问题出在那儿
凝好的胶你们都怎么保存的？灌胶不是只要没气泡就可以了么？还有什么特别的要求？...

我们今天又做了一次，昨天就配好了，也凝了，放在冰箱冻了一晚上，结果今天做的结果真是惨不忍睹，现在正在染色，不知道效果会不会惨不忍睹。。

条带在浓缩胶那是以一条线的，结果到了分离胶就有点斜了，还有一组是在分离胶里面以成团的形式。万念俱灰啊！！！

其实凝好的胶当时就用是最好的，要不然就放在冰箱里，否则基本就废了把。。最好当时凝当时就用。
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20楼2013-06-25 11:25:35
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-06-08 08:58:42
夏沐浅: 金币+5, ★有帮助 2013-06-08 13:56:42
我觉得你的marker跑成这样算是不错的了。呈倒梯形主要可能是因为你只点了marker。如果在两边的空白泳道上点与marker同样体积的上样buffer来保持一下压力，应该可以解决这个问题。至于缺两条带的问题，问一下缺的什么分子量的带？12%的胶上对有些分子量的蛋白可能分离效果差，跑不出来的。关于电压电流的问题，你设置的是稳压还是稳流跑？如果是稳流，需要把电压调高到200V以上，刚开始的时候电压比较低，60V也算是正常的，随着电泳过程电压会逐渐升高的。跑1小时40分不是很久，根据你设置的电流，一般小胶差不多是这个时间。
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2楼2013-06-08 00:27:33
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夏沐浅

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-08 00:27:33
我觉得你的marker跑成这样算是不错的了。呈倒梯形主要可能是因为你只点了marker。如果在两边的空白泳道上点与marker同样体积的上样buffer来保持一下压力，应该可以解决这个问题。至于缺两条带的问题，问一下缺的什么 ...

缺的那两个分子量是10kd和15kd的，虽然比较小，但是其他人做的12%的胶也跑出来了。
电泳我是恒流跑的，不是正常都在200V左右，所以电压设置的是300V，开始是60V，跑完了也才100V，而且做得好的胶跑完的话大概一个小时。
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清浅
3楼2013-06-08 14:00:48
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
wizardfan: 金币+2, 谢谢进一步的帮助 2013-06-09 08:25:38
引用回帖:
3楼: Originally posted by 夏沐浅 at 2013-06-08 14:00:48
缺的那两个分子量是10kd和15kd的，虽然比较小，但是其他人做的12%的胶也跑出来了。
电泳我是恒流跑的，不是正常都在200V左右，所以电压设置的是300V，开始是60V，跑完了也才100V，而且做得好的胶跑完的话大概一个 ...

10kd的带有可能接近溴酚蓝，所以看不太到也有可能。如果不是marker的质量问题的话，应该可以看到15kda的带。总体来说你的marker其它带不错。至于电压问题，看你设的电流是多少了，如果是小胶10-15mA/gel电压应该是你说的那个范围，时间也差不多。如果想跑快一些也是可以的，有人用20-25mA跑，不过可能会产生较多热。
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4楼2013-06-08 23:51:17
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