9楼: Originally posted by cynthia8225 at 2013-06-07 22:01:54
我觉得是A尾没加好。。。你可以用高保真PCR结束后直接加taq在72℃保持30min加尾。。。。还有可能你是用高保真PCR出了条带，但是可能不是你的条带（这个你可以直接测序PCR产物），再说了你要是两端有酶切位点的话就直 ...

12楼: Originally posted by 实心小白菜 at 2013-06-08 17:28:51
我记得有的高保真酶是加尾的，有的是不加尾巴的，如果酶本身能加尾巴，应该就挺容易的，你看那个那么便宜的taq酶只要P出来连T载体都没问题

13楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-06-08 18:53:58
你实在找不出原因就从酶试剂上找。用酶时要是酶处于最适状态，另外商用酶试剂一般都加有甘油，使用酶量较大或者试剂多，甘油对于酶的影响会更明显。你最好使用前用超滤或者透析适当去除甘油。

17楼: Originally posted by ccharlien at 2013-06-08 23:33:53
高保真酶扩完后直接在体系中加入普通taq酶（0.5ul就够了）72度保温十分钟然后再割胶回收做连接

16楼: Originally posted by fuding6 at 2013-06-08 22:00:14
我觉得你可以试一下高保真又带A的酶，比如全式金的HiFi酶。

18楼: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2013-06-09 08:19:58
谢谢，这样的效果是不是比胶回收以后再加A要好？...