应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 片段总是连不到T载体上
232/3返回列表上一页123下一页
查看: 4064  |  回复: 22
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by cynthia8225 at 2013-06-07 22:01:54
我觉得是A尾没加好。。。你可以用高保真PCR结束后直接加taq在72℃保持30min加尾。。。。还有可能你是用高保真PCR出了条带，但是可能不是你的条带（这个你可以直接测序PCR产物），再说了你要是两端有酶切位点的话就直 ...

我P出来的条带不是很单一，得切胶回收，所以得在切胶回收后才能加A。
赞一下 回复此楼
11楼2013-06-08 13:00:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

实心小白菜

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我记得有的高保真酶是加尾的，有的是不加尾巴的，如果酶本身能加尾巴，应该就挺容易的，你看那个那么便宜的taq酶只要P出来连T载体都没问题
赞一下 回复此楼
有啥不高兴的事儿，说出来大家乐呵乐呵~
12楼2013-06-08 17:28:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你实在找不出原因就从酶试剂上找。用酶时要是酶处于最适状态，另外商用酶试剂一般都加有甘油，使用酶量较大或者试剂多，甘油对于酶的影响会更明显。你最好使用前用超滤或者透析适当去除甘油。
赞一下 回复此楼
13楼2013-06-08 18:53:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 实心小白菜 at 2013-06-08 17:28:51
我记得有的高保真酶是加尾的，有的是不加尾巴的，如果酶本身能加尾巴，应该就挺容易的，你看那个那么便宜的taq酶只要P出来连T载体都没问题

我的酶是要自己加A的，说明书上写了，谢谢
赞一下 回复此楼
14楼2013-06-08 21:28:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-06-08 18:53:58
你实在找不出原因就从酶试剂上找。用酶时要是酶处于最适状态，另外商用酶试剂一般都加有甘油，使用酶量较大或者试剂多，甘油对于酶的影响会更明显。你最好使用前用超滤或者透析适当去除甘油。

谢谢
回复此楼
15楼2013-06-08 21:28:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuding6

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得你可以试一下高保真又带A的酶，比如全式金的HiFi酶。
赞一下 回复此楼
16楼2013-06-08 22:00:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ccharlien

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
高保真酶扩完后直接在体系中加入普通taq酶（0.5ul就够了）72度保温十分钟然后再割胶回收做连接
赞一下 回复此楼
17楼2013-06-08 23:33:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by ccharlien at 2013-06-08 23:33:53
高保真酶扩完后直接在体系中加入普通taq酶（0.5ul就够了）72度保温十分钟然后再割胶回收做连接

谢谢，这样的效果是不是比胶回收以后再加A要好？
赞一下 回复此楼
18楼2013-06-09 08:19:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by fuding6 at 2013-06-08 22:00:14
我觉得你可以试一下高保真又带A的酶，比如全式金的HiFi酶。

谢谢，我试过好几种高保真酶，只有现在用的这个效果最好。
赞一下 回复此楼
19楼2013-06-09 08:20:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ccharlien

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
18楼: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2013-06-09 08:19:58
谢谢，这样的效果是不是比胶回收以后再加A要好？...

我觉得会好很多，不会在加A之前就经历一次割胶回收的产物损失，而且不用组配两次PCR体系，这样操作TA克隆还没失败过
赞一下 回复此楼
20楼2013-06-09 16:28:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 夏天的普洱茶 的主题更新
232/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 Ocx3OKOzGU4q 2026-08-03 6/300 2026-08-04 11:36 by MWRYsWbJw4DE
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Ocx3OKOzGU4q 2026-08-03 6/300 2026-08-04 11:34 by MWRYsWbJw4DE
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 17/850 2026-08-04 09:46 by archvillain
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 f1dmPx051StA 2026-08-03 7/350 2026-08-04 09:31 by v1TJC4qJauAB
[博后之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 5/250 2026-08-04 09:27 by v1TJC4qJauAB
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 9/450 2026-08-04 09:17 by v1TJC4qJauAB
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 10/500 2026-08-04 09:15 by v1TJC4qJauAB
[基金申请] 系统今天又提示维护了，估计离放榜不远了 +12 winnerche 2026-07-29 16/800 2026-08-04 08:18 by Equinoxhua
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备？ 50+3 kf2781974 2026-07-31 10/500 2026-08-04 08:05 by 88817753
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 13/650 2026-08-04 07:30 by k7OM8YghWbkC
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 6/300 2026-08-04 06:10 by k7OM8YghWbkC
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 6/300 2026-08-04 04:47 by k7OM8YghWbkC
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 7/350 2026-08-04 04:46 by k7OM8YghWbkC
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 8/400 2026-08-04 03:21 by k7OM8YghWbkC
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +19 低垂的野花 2026-07-31 25/1250 2026-08-03 09:25 by gy116024
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +16 布布和一二 2026-07-30 22/1100 2026-08-03 09:20 by gy116024
[基金申请] 微信指数没变化，科研之友没阅读 +15 wangze12014 2026-07-28 19/950 2026-08-02 20:05 by 蔡棒棒菂
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液，是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭