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sars2012

新虫 (初入文坛)

[求助] 高分子量蛋白和低分子量蛋白过G75分不开

我做酶纯化的
我的高分子量蛋白在90kD左右 低分子量蛋白在25kD左右 但是过G75凝胶柱分不开 而且两者的量成比例洗脱下来
洗脱液是PB 7.0 20mM 、150mMNaCl、0.02%叠氮化钠。
头疼死了
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不转录的DNA

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢分享经验 2013-06-07 08:47:52
你是不是先将你的蛋白浓缩了???浓缩就会出现这种情况,蛋白会聚集形成聚集体,所以你用G75分不开!

无论你浓缩与否!我都建议你,加点还原剂!如DTT,最好浓度在10mM~50mM。如果你是浓缩再过G75,建议在浓缩之前加还原剂!浓缩之后加可能起到的效果不大!但是浓缩之后也要加还原剂,其实这并不矛盾!

希望对你有用!
长得比我英俊的,没我有才华!有才华的,没我长得俊!
2楼2013-06-06 18:27:30
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sars2012

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 不转录的DNA at 2013-06-06 18:27:30
你是不是先将你的蛋白浓缩了???浓缩就会出现这种情况,蛋白会聚集形成聚集体,所以你用G75分不开!

无论你浓缩与否!我都建议你,加点还原剂!如DTT,最好浓度在10mM~50mM。如果你是浓缩再过G75,建议在浓缩之 ...

对 我超滤浓缩了
加DTT会不会导致酶损失?
3楼2013-06-06 20:00:07
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不转录的DNA

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by sars2012 at 2013-06-06 20:00:07
对 我超滤浓缩了
加DTT会不会导致酶损失?...

正常情况下是不会的!
长得比我英俊的,没我有才华!有才华的,没我长得俊!
4楼2013-06-06 20:13:57
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