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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 高分子量蛋白和低分子量蛋白过G75分不开
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sars2012

新虫 (初入文坛)

[求助] 高分子量蛋白和低分子量蛋白过G75分不开

我做酶纯化的
我的高分子量蛋白在90kD左右 低分子量蛋白在25kD左右 但是过G75凝胶柱分不开 而且两者的量成比例洗脱下来
洗脱液是PB 7.0 20mM 、150mMNaCl、0.02%叠氮化钠。
头疼死了
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1楼 2013-06-06 11:11:02
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不转录的DNA

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢分享经验 2013-06-07 08:47:52
你是不是先将你的蛋白浓缩了？？？浓缩就会出现这种情况，蛋白会聚集形成聚集体，所以你用G75分不开！

无论你浓缩与否！我都建议你，加点还原剂！如DTT，最好浓度在10mM~50mM。如果你是浓缩再过G75，建议在浓缩之前加还原剂！浓缩之后加可能起到的效果不大！但是浓缩之后也要加还原剂，其实这并不矛盾！

希望对你有用！
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长得比我英俊的，没我有才华！有才华的，没我长得俊！
2楼2013-06-06 18:27:30
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sars2012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 不转录的DNA at 2013-06-06 18:27:30
你是不是先将你的蛋白浓缩了？？？浓缩就会出现这种情况，蛋白会聚集形成聚集体，所以你用G75分不开！

无论你浓缩与否！我都建议你，加点还原剂！如DTT，最好浓度在10mM~50mM。如果你是浓缩再过G75，建议在浓缩之 ...

对 我超滤浓缩了
加DTT会不会导致酶损失？
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3楼2013-06-06 20:00:07
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不转录的DNA

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by sars2012 at 2013-06-06 20:00:07
对 我超滤浓缩了
加DTT会不会导致酶损失？...

正常情况下是不会的！
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长得比我英俊的，没我有才华！有才华的，没我长得俊！
4楼2013-06-06 20:13:57
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