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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达做不出来了！
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sxxuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Bio海盗路飞 at 2013-06-06 15:55:42
是不是诱导剂出问题了？

用过两批IPTG，前一批一直在用的都没有问题，只是用完了。
我用的是1M的IPTG母液，终浓度是1mM，也就是50ml菌液里面加50ul母液，请问有么有加错？现在是什么都怀疑自己是错的
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你的日子如何，你的力量也必如何！
11楼2013-06-07 23:32:54
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sxxuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stevenshi021 at 2013-06-06 10:01:29
重新转化一下，你的细胞，千万别使用错细胞一定是DE3溶源菌。这种情况很少的，哪有之前可以表达现在不能表达啊。

事实上是我碰到了不止一次这样的情况，只是这次特别严重，之前的试过表达量低了，但这次是低了一千倍甚至一万倍，根本没办法做下游的纯化
DE3溶源菌和普通的BL21有什么区别不？我一直没有换感受态细胞，重组菌都是从同一管里面摇菌保存的。我试了好几管都这样，就会怀疑是不是自己用错了什么东西或者哪一步缺失了
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你的日子如何，你的力量也必如何！
12楼2013-06-07 23:36:28
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stevenshi021

新虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-06-10 16:59:40
使用PET载体一定要使用DE3的溶源菌，其可以提供T7RNA聚合酶工转录使用。
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13楼2013-06-10 10:34:20
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jing01492011

新虫 (初入文坛)
★
小丹木木: 金币+1, 安慰下 2013-08-13 16:37:10
引用回帖:
12楼: Originally posted by sxxuan at 2013-06-07 23:36:28
事实上是我碰到了不止一次这样的情况，只是这次特别严重，之前的试过表达量低了，但这次是低了一千倍甚至一万倍，根本没办法做下游的纯化
DE3溶源菌和普通的BL21有什么区别不？我一直没有换感受态细胞，重组 ...

我跟你一样的情况，前面表达，后来不表达，崩溃了都，是不是质粒突变了，我在重新连载体
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14楼2013-08-12 20:50:24
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sxxuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by jing01492011 at 2013-08-12 20:50:24
我跟你一样的情况，前面表达，后来不表达，崩溃了都，是不是质粒突变了，我在重新连载体...

后来什么都没有做，就好了
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你的日子如何，你的力量也必如何！
15楼2013-08-13 13:36:41
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ddtao

新虫 (小有名气)
建议用Polycysteine-dendritic poly(His,Arg)1:5试一试
http://www.novel-polylysine.com/main/home/htm.php?nowmenuid=2
huiyisu@126.com
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16楼2016-04-02 12:57:01
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