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sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Bio海盗路飞 at 2013-06-06 15:55:42
是不是诱导剂出问题了?

用过两批IPTG,前一批一直在用的都没有问题,只是用完了。
我用的是1M的IPTG母液,终浓度是1mM,也就是50ml菌液里面加50ul母液,请问有么有加错?现在是什么都怀疑自己是错的
你的日子如何,你的力量也必如何!
11楼2013-06-07 23:32:54
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sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stevenshi021 at 2013-06-06 10:01:29
重新转化一下,你的细胞,千万别使用错细胞一定是DE3溶源菌。这种情况很少的,哪有之前可以表达现在不能表达啊。

事实上是我碰到了不止一次这样的情况,只是这次特别严重,之前的试过表达量低了,但这次是低了一千倍甚至一万倍,根本没办法做下游的纯化
DE3溶源菌和普通的BL21有什么区别不?我一直没有换感受态细胞,重组菌都是从同一管里面摇菌保存的。我试了好几管都这样,就会怀疑是不是自己用错了什么东西或者哪一步缺失了
你的日子如何,你的力量也必如何!
12楼2013-06-07 23:36:28
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stevenshi021

新虫 (小有名气)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-06-10 16:59:40
使用PET载体一定要使用DE3的溶源菌,其可以提供T7RNA聚合酶工转录使用。
13楼2013-06-10 10:34:20
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jing01492011

新虫 (初入文坛)


小丹木木: 金币+1, 安慰下 2013-08-13 16:37:10
引用回帖:
12楼: Originally posted by sxxuan at 2013-06-07 23:36:28
事实上是我碰到了不止一次这样的情况,只是这次特别严重,之前的试过表达量低了,但这次是低了一千倍甚至一万倍,根本没办法做下游的纯化
DE3溶源菌和普通的BL21有什么区别不?我一直没有换感受态细胞,重组 ...

我跟你一样的情况,前面表达,后来不表达,崩溃了都,是不是质粒突变了,我在重新连载体
14楼2013-08-12 20:50:24
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sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by jing01492011 at 2013-08-12 20:50:24
我跟你一样的情况,前面表达,后来不表达,崩溃了都,是不是质粒突变了,我在重新连载体...

后来什么都没有做,就好了
你的日子如何,你的力量也必如何!
15楼2013-08-13 13:36:41
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ddtao

新虫 (小有名气)


16楼2016-04-02 12:57:01
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