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sxxuan

金虫 (著名写手)

[求助] 原核表达做不出来了!

去年构建了重组菌做原核表达,载体是pET28a,宿主菌是BL21,诱导都能得到高浓度的蛋白,之前只是纠结纯化结果不是很理想,谁知道最近一个多月,做了很多次表达,都不能表达出目的蛋白,送测序又没有问题,快崩溃了!
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你的日子如何,你的力量也必如何!
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sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stevenshi021 at 2013-06-06 10:01:29
重新转化一下,你的细胞,千万别使用错细胞一定是DE3溶源菌。这种情况很少的,哪有之前可以表达现在不能表达啊。

事实上是我碰到了不止一次这样的情况,只是这次特别严重,之前的试过表达量低了,但这次是低了一千倍甚至一万倍,根本没办法做下游的纯化
DE3溶源菌和普通的BL21有什么区别不?我一直没有换感受态细胞,重组菌都是从同一管里面摇菌保存的。我试了好几管都这样,就会怀疑是不是自己用错了什么东西或者哪一步缺失了
你的日子如何,你的力量也必如何!
12楼2013-06-07 23:36:28
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stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-06 11:46:34
sxxuan: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-06-07 23:33:34
sxxuan: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-06-07 23:36:53
重新转化一下,你的细胞,千万别使用错细胞一定是DE3溶源菌。这种情况很少的,哪有之前可以表达现在不能表达啊。
2楼2013-06-06 10:01:29
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Bio海盗路飞

木虫 (小有名气)

是不是诱导剂出问题了?
努力工作,让自己每天都能进步!
3楼2013-06-06 15:55:42
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linxt2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sxxuan: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-06-07 23:30:56
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-06-10 16:59:12
有可能是渗漏表达的影响,重新提质粒、转化,再进行表达。
小兵一个
4楼2013-06-06 16:50:06
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