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liujun1102

金虫 (正式写手)

[求助] 关于做染色质免疫共沉淀的几个问题,请高手赐教

小弟现在想做染色质免疫共沉淀,有几个问题。第一,用的枪头及EP管等等需要高压灭菌吗?第二,TE缓冲液能用双蒸水代替吗?如果能代替那么双蒸水需要灭菌吗?
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liujun1102

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-06-05 17:29:55
灭菌是生物实验最基本的要求, 灭菌的同时也把可能污染的蛋白, DNA破坏掉. 公司卖的都说他们已经灭过菌了. 理论上你不用再做一次, 当然如果你实验式里用的这些东西来自信誉可靠的公司.
第二个你是不是指最后得到的D ...

用TE不是最后保存DNA用,是IP之后解交联之前,洗抗体什么的用。最后DNA保存在elution buffer中
3楼2013-06-06 08:57:55
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
liujun1102: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2013-06-09 10:44:25
灭菌是生物实验最基本的要求, 灭菌的同时也把可能污染的蛋白, DNA破坏掉. 公司卖的都说他们已经灭过菌了. 理论上你不用再做一次, 当然如果你实验式里用的这些东西来自信誉可靠的公司.
第二个你是不是指最后得到的DNA? 因为貌似之后最后纯化DNA时用到TE. 这个不能用双蒸水, 因为对长期保存DNA不利, 如果你担心TE里面的EDTA会影响PCR, 你可以用10mM Tris(pH 8.0) 代替.
2楼2013-06-05 17:29:55
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

明白, 我不用TE的, 洗完LiCl就是elution buffer了. 但是能不能用纯水代替我说不准.
4楼2013-06-06 15:52:20
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liujun1102

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-06-06 15:52:20
明白, 我不用TE的, 洗完LiCl就是elution buffer了. 但是能不能用纯水代替我说不准.

问下,有了input了,还用做actin内参吗?IP之后提纯的DNA是不是只是和抗体结合的DNA,还能做出来actin内参吗?如果能做出来,那么做actin是不是就不用做input了?高手回答
5楼2013-06-08 13:52:26
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