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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 怎么检测分泌在培养液中的EGFP啊！！！
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新虫 (初入文坛)

[求助] 怎么检测分泌在培养液中的EGFP啊！！！

怎么检测分泌在培养液中的EGFP啊！！！
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1楼 2013-06-05 10:37:30
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喜欢猫草

新虫 (初入文坛)
我建了个分泌型载体，分泌EGFP,但是分泌????高，??两天???了个ELISA,什么颜色都没有，但是没设阳性对照，???能是我??作问题。我说???westen,但师兄说LB的??分?????，我浓缩了之??????蛋白太多，???能也?????出???。?????有没有什么好办法啊~
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2楼2013-06-05 11:05:47
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喜欢猫草

新虫 (初入文坛)
???????:
2?: Originally posted by ???è?? at 2013-06-05 11:05:47
我建了个分泌型载体，分泌EGFP,但是分泌????高，??两天???了个ELISA,什么颜色都没有，但是没设阳性对照，???能是我??作问题。我说???westen,但师兄说LB? ...

???????????????壬????EGFP??????????????????????????????ELISA???????????У?????????????????????????????????????????????????westen??????LB?????????????????????????LB????????????????ò??????????????????????λ?????????????????????
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3楼2013-06-05 11:26:40
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kx444555

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议你先确定抗体是不是正确的？有没有完全按照抗体说明书里的稀释比去做？
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星陈代谢
4楼2013-06-05 11:48:44
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linxt2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
为什么需要用分泌表达的？
eGFP很好表达的，用E.coli细胞内表达即可。

可以尝试浓缩一下，比如用离子交换层析等。
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小兵一个
5楼2013-06-05 14:27:49
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
喜欢猫草: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-06-09 08:24:04
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-03 02:16:48
建议这样先拿分泌有EGFP的培养液和正常的培养液到绿色倒置荧光显微镜下看一下，看分泌液与对照相比有没有绿色荧光，然后将分泌液浓缩一下做个western 看一下有没有条带 这个western很好做的
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6楼2013-06-05 15:11:00
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喜欢猫草

新虫 (初入文坛)
多谢各位
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7楼2013-07-02 21:50:41
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)
量多得话都能看见  要不用plate reader读下数也可以
培养media用M9+一定的casaminoacid和甘油
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8楼2013-07-02 22:16:18
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2013-07-03 02:17:02
我随便用碱裂解液裂解表达sfGFP的ecoli  溶液完全是绿的。
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9楼2013-07-02 22:17:21
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