应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台» 网络生活区» 有奖问答 » 有奖问答完结子版 » 学术实验 » 求助Tris-Hcl缓冲液配置问题
121/2返回列表12下一页
查看: 890  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

cheng7692

金虫 (正式写手)

[交流] 求助Tris-Hcl缓冲液配置问题

现在提取一物质，完全是参照别人文献做的，就是提不出来，都1个多月了，人都快崩溃了。
现在都开始怀疑自己了。唯一没有check的就是buffer了，现在求助大家。
1. 10 mM的Tris-HCl，pH8.6
因为实验室的 Tris-HCl不是Tris base，就是Tris-HCl，分子量是157.6，所以配置方法入下：
称1.576g 于1000mL 双蒸水中，用6M的NaOH调pH到8.6

2. 100 mM的Tris-HCl，pH8.6
所以配置方法入下：
称15.76g 于1000mL 双蒸水中，用6M的NaOH调pH到8.6

3. 3 mM MgCl2 溶液

因为实验室的是MgCl2.5H2O（分子量203），所以要去除5分子水的含量，配置如下：
称 3.2533g MgCl2.5H2O 于250 mL 双蒸水中。

4. 200 mL buffer ( 3 mM MgCl2 AND 100 mM的Tris-HCl，pH8.6)

配置如下，各取2，3溶液100 mL，混匀，调pH至8.6

[ Last edited by cheng7692 on 2007-10-12 at 08:40 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2007-10-12 08:38:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

春秋无乱

★ ★
cheng7692(金币+2,VIP+0):谢谢回答
是否可以试试先配1M的 buffer，调节pH8.6，用时稀释10、100倍呢。
赞一下(4人) 回复此楼
2楼2007-10-12 08:53:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

春秋无乱

称1.576g 于1000mL 双蒸水中，用6M的NaOH调pH到8.6？



好像最后定容的体积就不是1L了啊！！

先调pH，再定容，试试

比如说，秤取之后溶到800mL，调pH后，再定容到1000mL。
赞一下 回复此楼
3楼2007-10-12 09:03:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

reasonspare

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
cheng7692(金币+18,VIP+0):谢谢回答
1. 10 mM的Tris-HCl，pH8.6
因为实验室的 Tris-HCl不是Tris base，就是Tris-HCl，分子量是157.6，所以配置方法入下：
称1.576g 于1000mL 双蒸水中，用6M的NaOH调pH到8.6

2. 100 mM的Tris-HCl，pH8.6
所以配置方法入下：
称15.76g 于1000mL 双蒸水中，用6M的NaOH调pH到8.6

12 没有错，，

3. 3 mM MgCl2 溶液

因为实验室的是MgCl2.5H2O（分子量203），所以要去除5分子水的含量，配置如下：
称 3.2533g MgCl2.5H2O 于250 mL 双蒸水中。

出错了，

你楼主你要得是mole浓度，你知道的，

质量/分子量 就是物质的摩尔浓度。

你为什么无缘无故将结晶水去掉，而人家实际上本身就这样

换句话说：MgCl2.5H2O（分子量203） 称203克是1mol

              203-18*5=113  按着楼主的意思，称取 113克 含有5个水的 氯化镁就是1mol。

你可是犯了个低级错误，
你要的是物质量浓度， 你就是将带结晶水放到水里 还是只有 氯化镁，，，，，

楼主再仔细想想，。，，

4、由于三出错，所以这个错了，
  还有在4时就不要再调PH了， 多此一举。



哈哈哈哈， 仔细一看，是不是楼主搞错了，

10mM的Tris 是无论如何配不出 100mM的Tris
100ml 的100mM + 100ml 3mM的MgCl2
总浓度 楼主自己算算，哈哈哈

建议如下

先配tris 调好Ph后，
称去定量氯化镁 按物质量浓度算，。，，，，哈哈哈
直接用Tris定容就可以了，

哈哈哈哈，

[ Last edited by reasonspare on 2007-10-12 at 09:24 ]
赞一下(4人) 回复此楼
大慈大悲观世音救苦救难观世音有求必应观世音普渡众生观世音千手千眼观世音官大敢管观世音无处不在观世音普观普长观世音南无观世音菩萨
4楼2007-10-12 09:21:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cheng7692

金虫 (正式写手)
第三是有问题啊，现在脑袋晕的，明天接着看，第四我在发贴之前已经发现了，但是我的1，2，3是已经配好的，要是可以2＋3，那我就不用入楼上的做，但是还是不确定，所以就发出来了。
还有一个楼上说“10mM的Tris 是无论如何配不出 100mM的Tris ”，我没有这样做啊，请指教
赞一下 回复此楼
5楼2007-10-12 10:34:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

reasonspare

木虫 (著名写手)
你无论1，2 配 4
各100ml 只能使它们的浓度减半，难道 4 括号里面不是终浓度？
赞一下 回复此楼
大慈大悲观世音救苦救难观世音有求必应观世音普渡众生观世音千手千眼观世音官大敢管观世音无处不在观世音普观普长观世音南无观世音菩萨
6楼2007-10-12 10:54:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

maxuedong

至尊木虫 (著名写手)

小木虫终身顾问
引用回帖:
Originally posted by reasonspare at 2007-10-12 09:21:
1. 10 mM的Tris-HCl，pH8.6
因为实验室的 Tris-HCl不是Tris base，就是Tris-HCl，分子量是157.6，所以配置方法入下：
称1.576g 于1000mL 双蒸水中，用6M的NaOH调pH到8.6

2. 100 mM的Tris-HCl，pH8.6
所以配 ...

完全同意你的说法,绝对正确.
赞一下 回复此楼
平平淡淡才是真
7楼2007-10-12 11:08:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zijun6

金虫 (小有名气)
用PH计调很方便!
赞一下 回复此楼
8楼2007-10-12 11:39:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weierdulan

铜虫 (小有名气)

去

缓冲液不是主要问题，你的其他步骤是否应该再考虑一下？
赞一下 回复此楼
9楼2007-10-18 12:38:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yellow.

★
楼兰少女(金币+1,VIP+0):感谢您热心参与应助
一般好像都是配1M的Tris-cl储液，用时稀释
至少我们实验室是这样
10mM、100mM的配着真够呛
赞一下(10人) 回复此楼
10楼2007-10-19 09:58:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cheng7692 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭