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袁1231金虫 (小有名气)
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[求助]
NIH 3T3S 细胞Trk 受体western检测问题
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| 大家好，我从别人那要了一株NIH-3T3S 细胞，稳定表达Trk受体，理论上，加上BDNF就能激活受体磷酸化，但是我反复做总做不出来。第一次做的细胞，空白对照和BDNF高浓度处理的细胞裂解后跑胶，western可以看到Trk受体， 所有的空都能看到磷酸化的Trk受体 （Tyr706）.可是因为我中间strip了好多次，导致我beta actin的带有些被洗掉了，于是我用同一份细胞裂解液重做一次，可是怎么也做不出来了。细胞裂解液是放在-20保存的，一抗在牛奶里-20度保存，重复用。大家觉得是什么问题？western新手，望大家赐教。 |
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