24小时热门版块排行榜    

查看: 643  |  回复: 3

vita198861

铁虫 (正式写手)

[求助] 求教定量PCR

图1之前做的GADPH的定量的溶解曲线,普通PCR是没问题的。
求教定量PCR
图1.jpg
后来因为污染,重新订了引物,当然也重新提了RNA反转录cDNA。
跑出来来的普通PCR是图2。
求教定量PCR-1
图3.jpg
最右边那个是GADPH,这一批12个引物跑出来都有一个600+的杂带。我觉得可能是RNA的问题,我就重新提了一次,跑出来是图3

求教定量PCR-2
图2.jpg

杂带淡了很多,但还是有。GAPDH是12,marker是600的。
只跑了GAPDH标线看。溶解曲线结果图4


求教定量PCR-3
[图4.jpg前面弯弯曲曲到底为什么呢?RNA已经重提,引物是新的之前也试过没问题。
好痛苦,谁能指导一下···

[ Last edited by vita198861 on 2013-5-30 at 12:13 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

louisa俊

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
vita198861(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-05-30 18:52:07
溶解曲线前面有杂峰,说明有其他非特异性扩增。。。可能是引物的问题,也可能是你提的RNA里面含有杂质
2楼2013-05-30 13:16:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhoulubin

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没有除DNA的步骤吗?为什么会有600bp条带?
另外,普通PCR的结果不能用来知道Q-PCR,Q-PCR的结果通过做NTC和样品的溶解曲线和扩增曲线来判断。如果怀疑Q-PCR有杂带,可以拿Q-PCR产物跑电泳看看,甚至测序,有些杂志就有这样的要求
每个年龄都有其最应该做的事,但只有过了那个年龄自己才知道
3楼2013-06-01 15:15:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

porphybaby

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

其实我觉得 不会完全 一点杂带都没有吧

有时候你 跑电泳 它就是会 出来一些 杂带的
4楼2013-06-03 00:13:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 vita198861 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +6 雨打竹帘 2026-08-30 10/500 2026-08-31 09:29 by huixian257
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 面上意见出来了 +10 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 19/950 2026-08-31 08:01 by blueearth171
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
请填处理意见