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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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开放式郭东杰

木虫 (正式写手)


[交流] PCR问题

为什么跑完胶总是i有很多二聚体    是说明引物浓度过高么?还有marker分不开粉的不好使为什么  谁能解答一下
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songzuowei

木虫 (著名写手)


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开放式郭东杰(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-05-29 02:05:52
gyesang: 回帖置顶 2013-05-29 02:05:54
老是出现异物二聚体的原因有以下几个方面:1,引物设计不好,引物不能很好的与模板配对2,引物浓度过高,需要稀释3,退火温度过低,适当提高退火温度
marker跑不开原因有二:1,胶配的不好,可能溶解不充分,胶成分不均匀2,电泳缓冲液不新鲜,需重新换缓冲液
7楼2013-05-28 17:52:04
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


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开放式郭东杰: 金币+1 2013-05-30 15:22:16
引用回帖:
3楼: Originally posted by 开放式郭东杰 at 2013-05-28 15:48:37
退火温度挑了很多次   而且跑过梯度   主要最基本的marker分不开这不是有点诡异么...

有可能是胶的浓度与marker的分子量范围不匹配,或者是电泳时间太短。
9楼2013-05-29 07:37:04
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普通回帖

静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)


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开放式郭东杰: 金币+1 2013-05-30 15:22:37
一般是调整退火温度吧
2楼2013-05-28 15:28:48
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开放式郭东杰

木虫 (正式写手)


引用回帖:
2楼: Originally posted by 静安jingan at 2013-05-28 15:28:48
一般是调整退火温度吧

退火温度挑了很多次   而且跑过梯度   主要最基本的marker分不开这不是有点诡异么
3楼2013-05-28 15:48:37
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asdry

木虫 (职业作家)



开放式郭东杰: 金币+1 2013-05-30 15:22:59
祝楼主诸事顺利,心想事成!
4楼2013-05-28 16:04:53
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
开放式郭东杰: 金币+1 2013-05-30 15:23:05
引用回帖:
3楼: Originally posted by 开放式郭东杰 at 2013-05-28 15:48:37
退火温度挑了很多次   而且跑过梯度   主要最基本的marker分不开这不是有点诡异么...

marker都分不开?电泳液和胶浓度都换过了么
5楼2013-05-28 16:50:01
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zhangzhilai

金虫 (正式写手)


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开放式郭东杰: 金币+1 2013-05-30 15:23:08
若是退火温度不能解决的话,可能是引物设计的有问题!
6楼2013-05-28 17:04:34
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guxinhan123

银虫 (正式写手)


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开放式郭东杰(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-29 02:06:10
楼上总结很好,ps 胶浓度是多少,调整下胶浓度
8楼2013-05-28 18:48:06
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heimei0211

金虫 (小有名气)



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是不是marker出问题了,你换换新的marker试试
10楼2013-05-29 08:43:09
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kidchang

至尊木虫 (正式写手)


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开放式郭东杰: 金币+1 2013-05-30 15:23:50
关于MARKER,可以试试调低电压,增长电泳时间
关于引物2聚体,尝试重新设计,使用软件,排除二聚体。同时减少引物量
11楼2013-05-29 09:14:01
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wangqi1107

银虫 (小有名气)


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开放式郭东杰: 金币+1 2013-05-30 15:23:43
给出图片吧 还有你的PCR体系 PCR程序给全了信息才好分析
12楼2013-05-29 09:14:04
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