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开放式郭东杰

木虫 (正式写手)

[交流] PCR问题

为什么跑完胶总是i有很多二聚体    是说明引物浓度过高么？还有marker分不开粉的不好使为什么  谁能解答一下
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1楼 2013-05-28 15:04:43
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回帖置顶 ( 共有1个 )

songzuowei

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
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开放式郭东杰(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-29 02:05:52
gyesang: 回帖置顶 2013-05-29 02:05:54
老是出现异物二聚体的原因有以下几个方面：1，引物设计不好，引物不能很好的与模板配对2，引物浓度过高，需要稀释3，退火温度过低，适当提高退火温度
marker跑不开原因有二：1，胶配的不好，可能溶解不充分，胶成分不均匀2，电泳缓冲液不新鲜，需重新换缓冲液
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7楼2013-05-28 17:52:04
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
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开放式郭东杰: 金币+1 2013-05-30 15:22:16
引用回帖:
3楼: Originally posted by 开放式郭东杰 at 2013-05-28 15:48:37
退火温度挑了很多次   而且跑过梯度   主要最基本的marker分不开这不是有点诡异么...

有可能是胶的浓度与marker的分子量范围不匹配，或者是电泳时间太短。
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9楼2013-05-29 07:37:04
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普通回帖

静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
开放式郭东杰: 金币+1 2013-05-30 15:22:37
一般是调整退火温度吧
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2楼2013-05-28 15:28:48
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开放式郭东杰

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 静安jingan at 2013-05-28 15:28:48
一般是调整退火温度吧

退火温度挑了很多次   而且跑过梯度   主要最基本的marker分不开这不是有点诡异么
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3楼2013-05-28 15:48:37
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asdry

木虫 (职业作家)
★
开放式郭东杰: 金币+1 2013-05-30 15:22:59
祝楼主诸事顺利，心想事成！
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4楼2013-05-28 16:04:53
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
开放式郭东杰: 金币+1 2013-05-30 15:23:05
引用回帖:
3楼: Originally posted by 开放式郭东杰 at 2013-05-28 15:48:37
退火温度挑了很多次   而且跑过梯度   主要最基本的marker分不开这不是有点诡异么...

marker都分不开？电泳液和胶浓度都换过了么
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5楼2013-05-28 16:50:01
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zhangzhilai

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
开放式郭东杰: 金币+1 2013-05-30 15:23:08
若是退火温度不能解决的话，可能是引物设计的有问题！
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6楼2013-05-28 17:04:34
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guxinhan123

银虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
开放式郭东杰(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-29 02:06:10
楼上总结很好，ps 胶浓度是多少，调整下胶浓度
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8楼2013-05-28 18:48:06
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heimei0211

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是不是marker出问题了，你换换新的marker试试
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10楼2013-05-29 08:43:09
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kidchang

至尊木虫 (正式写手)
★ ★
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开放式郭东杰: 金币+1 2013-05-30 15:23:50
关于MARKER，可以试试调低电压，增长电泳时间
关于引物2聚体，尝试重新设计，使用软件，排除二聚体。同时减少引物量
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11楼2013-05-29 09:14:01
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wangqi1107

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
开放式郭东杰: 金币+1 2013-05-30 15:23:43
给出图片吧 还有你的PCR体系 PCR程序给全了信息才好分析
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12楼2013-05-29 09:14:04
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