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jiapingshk

铜虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白考染

为什么我的蛋白样品跑完蛋白胶后，用考马斯亮蓝R-250过夜考染并且脱色后看不到条带而只染两小时脱色后条带就可见？其它的一切正常。
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1楼 2013-05-28 10:48:22
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不转录的DNA

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jiapingshk: 金币+5, ★有帮助 2013-05-28 21:23:08
myprayer: 金币+1, 感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-29 08:33:21
楼主，给你点提示吧！
不知你的SDS-page有木有用固定液固定？？？？！！！！！
你用考马斯亮蓝R-250过夜考染，而没有先进行固定！当然过夜他就扩散了！所以脱色之后就看不到条带了！

如果你不及时用固定液固定！就会出现你所说的现象！希望能帮你解惑！
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长得比我英俊的，没我有才华！有才华的，没我长得俊！
2楼2013-05-28 21:02:11
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jiapingshk

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 不转录的DNA at 2013-05-28 21:02:11
楼主，给你点提示吧！
不知你的SDS-page有木有用固定液固定？？？？！！！！！
你用考马斯亮蓝R-250过夜考染，而没有先进行固定！当然过夜他就扩散了！所以脱色之后就看不到条带了！

如果你不及时用固定液固定 ...

固定液没有用，不过以前别的蛋白样都是过夜染的，也没什么问题，能给我说下您的固定液是怎么配的吗？
赞一下 回复此楼
3楼2013-05-28 21:22:58
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不转录的DNA

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-29 08:33:30
jiapingshk: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-05-29 10:41:08
引用回帖:
3楼: Originally posted by jiapingshk at 2013-05-28 21:22:58
固定液没有用，不过以前别的蛋白样都是过夜染的，也没什么问题，能给我说下您的固定液是怎么配的吗？...

固定液：500mL乙醇，100mL冰醋酸，用蒸馏水定容至1000mL

也就相当于乙醇：冰醋酸=5:1，有人用甲醇代替！
其实染色液中就含有0.08%的乙酸，因为乙酸就起到固定的作用！不知你的蛋白为什么会固定不住！

你可以用固定液试一试！
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长得比我英俊的，没我有才华！有才华的，没我长得俊！
4楼2013-05-28 22:06:22
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