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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR引物问题
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wulj513

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
左九年(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-29 02:01:30
gyesang: 回帖置顶 2013-05-29 02:01:34
左九年: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-05-29 19:35:15
你这一对引物不是很好。引物一般是18-27个碱基，常用20个碱基；然后就是你的正向引物退火温度太低，一般在45-60度最好；你的上下游引物的Tm值相差比较大，最好相近；你的反向引物GC含量太大了，一般在45%-55%；此外，引物不应有发夹结构，即不能有4bp以上的回文序列；两引物间不应有大于4pb以上的互补序列或同源序列，在3’端不应有任何互补碱基。
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有所弃才有所为，有所为才有所不为！
11楼2013-05-28 22:49:39
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wangweijian

金虫 (小有名气)
要是这对引物能P出来，那真是颠覆了所有PCR引物设计原则了。
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12楼2014-01-14 15:57:17
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