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anruoka

木虫 (正式写手)

[求助] 求助:10吨发酵罐培养大肠杆菌OD下降问题 已有5人参与

10吨发酵罐 生产用菌种 大肠杆菌 最近一个月突然出现一个问题:菌种长到一定阶段,有时候是加补料之前,有时候是之后。半个小时到一个小时时间内OD600,很快降到1以下,在OD下降之前,通常DO上升,泡沫很多,很粘稠。做双层板没有噬菌斑,偶尔培养两天以后部分菌落中心有空白,菌落呈圆环庄,不是噬菌斑那种透明圈。奇怪的是,发酵液OD已经很低了,拿过来用LB摇瓶还能长起来。找不到是什么原因,无聊、压缩空气什么的都排查过,还是解决不了,几乎每一罐都要挂掉。
求助:10吨发酵罐培养大肠杆菌OD下降问题
QQ图片20130522222011.jpg


求助:10吨发酵罐培养大肠杆菌OD下降问题-1
QQ图片20130522222502.jpg
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我是一只好虫子
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anruoka

木虫 (正式写手)

引用回帖:
16楼: Originally posted by yfzhang2008 at 2013-06-03 14:53:34
从你平板上看不到圆柱状的
从你描述看,是染了噬菌体造成的。
电镜看不到不能证明没有染噬菌体。
双层板验证噬菌斑,建议到别的无菌间(实验室)取没有经过污染的菌液先铺一遍再做。你把罐上染了噬菌体的拿回无菌 ...

就是拿指示菌做是么 能具体说一下怎么操作么~~
我们是把指示菌和发酵液上清混合20min,混到上层板扑上去
我是一只好虫子
18楼2013-06-03 22:12:55
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志子

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励交流! 2013-05-27 08:19:26
是否罐压过高,压力升高导致CO2溶解度上升得比氧的快。而发酵液中CO2浓度过高,会影响代谢,可能会毒害细胞。
但是看你平板,,,,如果是噬菌体污染,建议实验把菌种和培养基都换了小试一下看。
2楼2013-05-26 01:51:41
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anruoka

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 志子 at 2013-05-26 01:51:41
是否罐压过高,压力升高导致CO2溶解度上升得比氧的快。而发酵液中CO2浓度过高,会影响代谢,可能会毒害细胞。
但是看你平板,,,,如果是噬菌体污染,建议实验把菌种和培养基都换了小试一下看。

罐压很低,培养基和发酵工艺都是确定的,做了很多年了
我是一只好虫子
3楼2013-05-26 11:24:01
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小花木兰

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励交流! 2013-05-27 08:19:36
培养基组成有关的,影响很大,还有补料也有关系
4楼2013-05-26 20:42:40
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