应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于用OPC柱纯化长链脂酰辅酶A的操作，以及高胰岛素-正葡萄糖钳夹问题
31/1返回列表
查看: 638  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

harbingeryg

金虫 (小有名气)

[求助] 关于用OPC柱纯化长链脂酰辅酶A的操作，以及高胰岛素-正葡萄糖钳夹问题

文献：Mechanism by Which Fatty Acids Inhibit Insulin Activation of
Insulin Receptor Substrate-1 (IRS-1)-associated Phosphatidylinositol
3-Kinase Activity in Muscle

描述如下：LCACoAs were extracted from frozen tissue samples (100 mg)
and purified using a solid phase extraction method described previously
by Deutsch et al. (15) with minor modifications for desalting. A known
amount of heptadecanoyl-CoA was added as an internal standard. OPC
columns (Applied Biosystems, Foster City, CA) were used for solid
phase extraction. Samples were dissolved in 100 l of methanol/H2O for
LC/MS/MS analysis.

查了参考文献，翻译出来是这样的：
100mg 组织样品置于2 mL 100mM 磷酸二氢钾溶液中（PH=4.9），匀浆20 s，加入2 mL异丙醇，继续匀浆20 s，加入0.25 mL 饱和硫酸铵，4 mL 乙腈，涡旋5min，5min 1900g 离心，取上清，用10 mL 100mM 磷酸二氢钾溶液（PH=4.9）稀释。
Applied Biosystem Oligonucleotide purification cartridge (OPC). 乙腈5 mL冲洗，轻微过空气，25mM 磷酸二氢钾 5 mL，轻微过空气。聚丙烯注射针注入样品约15 mL， 25mM 磷酸二氢钾 5 mL 冲洗，抽干，两次。60%乙腈-100mM磷酸二氢钾0.3 mL,缓慢洗脱。后0.25mL为目标洗脱物。十七酰辅酶A作为内标。
脱盐处理。样品溶于100 uL 甲醇/水。
本人药物分析专业，只用过ODS固相小柱，没用过OPC柱，据说是纯化核酸的。

想请教的问题是：
1. OPC柱似乎也有类似的“活化”过程，但是为什么要轻微通过空气？ODS柱是要避免过空气抽干的。
2. 参考文献中由于是一般的液相方法，现在要进质谱所以要脱盐。文献中的minor modifications for desalting, 这个脱盐是要怎么弄？具体是在原方法基础上增加或者修改了什么步骤？求做过核酸和脂质纯化的前辈解答。
3. 额外问题一个，高胰岛素-正葡萄糖钳夹操作中，如何控制葡萄糖输入量，以维持血糖在正常范围？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-05-21 17:55:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

harbingeryg

金虫 (小有名气)
求各位前辈解答啊
赞一下 回复此楼
2楼2013-05-22 00:04:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

harbingeryg

金虫 (小有名气)
好伤心 为啥没人理我呢
赞一下 回复此楼
3楼2013-06-04 20:00:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 harbingeryg 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-17 02:50 by Tql5LQhh5rLK
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 6/300 2026-09-17 02:38 by Tql5LQhh5rLK
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-17 02:26 by Tql5LQhh5rLK
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 i3KBRD19ERkG 2026-09-16 3/150 2026-09-17 00:50 by Tql5LQhh5rLK
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +8 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 11/550 2026-09-16 18:37 by rRvxEj3zorCy
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 6/300 2026-09-16 17:27 by i3KBRD19ERkG
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-16 14:39 by i3KBRD19ERkG
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-16 14:27 by i3KBRD19ERkG
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组｜2027级博士研究生招生公告 +7 水士口 2026-09-16 8/400 2026-09-16 13:47 by kkklens
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-16 07:12 by LH5NkK5Ud4bh
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 4/200 2026-09-16 06:27 by LH5NkK5Ud4bh
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +7 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-16 02:23 by DgNGHc3h5tPl
[考博] 申博发邮件 +4 Lmengk 2026-09-15 4/200 2026-09-16 00:05 by 木心想继续深造
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 20:14 by zNcEhTcH7ihq
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 0pYnUiPDfdnk 2026-09-14 3/150 2026-09-15 19:35 by CgyNCDVNhGVg
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-15 18:47 by CgyNCDVNhGVg
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 07:50 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:46 by C79jjtjAKjEn
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:50 by 5BDX0d0WFp7t
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:38 by 5BDX0d0WFp7t
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭