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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr问题
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...山雨

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr问题

取1ul基因组做模板pcr后，为啥电泳时胶上没有该基因组对应的条带呢？取同样的1ul直接电泳就有带啊。
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1楼 2013-05-21 11:38:20
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

j134104

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
...山雨: 金币+2, ★有帮助 2013-05-24 21:20:26
想到一个问题。在pcr过程中dna断裂成小片段了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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9楼2013-05-21 22:49:45
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普通回帖

愤怒的小笨鸟

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
模板浓度太高，稀释50倍，100倍后取1uL试试
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2楼2013-05-21 11:45:45
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j134104

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
取1ul基因组做模板pcr后，这样1ul就稀释到了25ul了。然后你取其中的3ul点样，当然没条带

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2013-05-21 12:44:44
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR时模板浓度太高会影响特异性，甚至什么都P不出来。如果1μl的基因组DNA可以看到条带，说明样品浓度很高了，你应该稀释模板后再做PCR。
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4楼2013-05-21 14:20:34
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...山雨

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 愤怒的小笨鸟 at 2013-05-21 11:45:45
模板浓度太高，稀释50倍，100倍后取1uL试试

大哥，金币不能给啊，请看清问题。
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5楼2013-05-21 16:24:14
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...山雨

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by j134104 at 2013-05-21 12:44:44
取1ul基因组做模板pcr后，这样1ul就稀释到了25ul了。然后你取其中的3ul点样，当然没条带

不是取3ul电泳，而是pcr后全部上样电泳了。
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6楼2013-05-21 16:25:31
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...山雨

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-21 14:20:34
PCR时模板浓度太高会影响特异性，甚至什么都P不出来。如果1μl的基因组DNA可以看到条带，说明样品浓度很高了，你应该稀释模板后再做PCR。

请看清问题。。。。
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7楼2013-05-21 16:26:29
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...山雨

新虫 (初入文坛)
...山雨: 回帖置顶 2013-05-21 17:13:22
难道是我表述问题，我的意思是pcr加进去的模板（基因组）为啥后来就没有了，如果有为啥电泳时没有模板对应的条带。
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8楼2013-05-21 17:13:00
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
...山雨(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-22 08:48:10
gyesang: 回帖置顶 2013-05-22 08:48:27
...山雨: 金币+2, ★有帮助 2013-05-24 21:20:40
引用回帖:
7楼: Originally posted by ...山雨 at 2013-05-21 16:26:29
请看清问题。。。。...

PCR产物电泳时全部上样了吗？如果是的话，说明PCR过程中模板断裂了。如果不是，说明只是上样量比只点模板时的上样量少，所以可能看不见。
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10楼2013-05-22 07:12:10
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