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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr问题
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...山雨

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr问题

取1ul基因组做模板pcr后，为啥电泳时胶上没有该基因组对应的条带呢？取同样的1ul直接电泳就有带啊。
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1楼 2013-05-21 11:38:20
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by ...山雨 at 2013-05-23 11:57:10
是啊，全部上样了，可以肯定模板的量是足够的，因为取同样的量直接电泳就可以有很亮的带。至于是不是断了，这个有待各位大侠继续讨论。...

你的意思是说怕PCR体系里污染了核酸酶，降解了模板？还是说你觉得提的模板热稳定性差？如果是前者的话，需要更换PCR体系。
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15楼2013-05-23 12:59:18
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愤怒的小笨鸟

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
模板浓度太高，稀释50倍，100倍后取1uL试试
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2楼2013-05-21 11:45:45
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j134104

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
取1ul基因组做模板pcr后，这样1ul就稀释到了25ul了。然后你取其中的3ul点样，当然没条带

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2013-05-21 12:44:44
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR时模板浓度太高会影响特异性，甚至什么都P不出来。如果1μl的基因组DNA可以看到条带，说明样品浓度很高了，你应该稀释模板后再做PCR。
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4楼2013-05-21 14:20:34
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