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...山雨

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr问题

取1ul基因组做模板pcr后,为啥电泳时胶上没有该基因组对应的条带呢?取同样的1ul直接电泳就有带啊。
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by ...山雨 at 2013-05-23 11:57:10
是啊,全部上样了,可以肯定模板的量是足够的,因为取同样的量直接电泳就可以有很亮的带。至于是不是断了,这个有待各位大侠继续讨论。...

你的意思是说怕PCR体系里污染了核酸酶,降解了模板?还是说你觉得提的模板热稳定性差?如果是前者的话,需要更换PCR体系。
15楼2013-05-23 12:59:18
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查看全部 16 个回答

愤怒的小笨鸟

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
模板浓度太高,稀释50倍,100倍后取1uL试试
2楼2013-05-21 11:45:45
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j134104

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
取1ul基因组做模板pcr后,这样1ul就稀释到了25ul了。然后你取其中的3ul点样,当然没条带

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2013-05-21 12:44:44
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR时模板浓度太高会影响特异性,甚至什么都P不出来。如果1μl的基因组DNA可以看到条带,说明样品浓度很高了,你应该稀释模板后再做PCR。
4楼2013-05-21 14:20:34
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