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306495799

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by edoz1986 at 2013-05-22 17:24:20
10mM dtt 上ni柱 天哪,ni 都被你dtt 还原了。一般2mm上镍柱的时候就会有影响。如果非要加入这么多的还原剂的话,建议用tcep  对柱子无伤害。

我的蛋白是变性液溶解的沉淀,后1:20加入复性液中,再过柱子的
也许似乎大概是,然而未必不见得
11楼2013-05-23 09:07:14
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edoz1986

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-23 22:13:48
引用回帖:
11楼: Originally posted by 306495799 at 2013-05-23 09:07:14
我的蛋白是变性液溶解的沉淀,后1:20加入复性液中,再过柱子的...

复性液中有多少dtt?
复性是否成功呢?
可以取少量复性蛋白透析到8m尿素中再挂镍柱,看看是否挂。如果挂的话就是你的复性没成功,或者复性后你的6个his被折叠到分子内部去了。
12楼2013-05-23 10:03:18
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stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-23 22:13:56
这与你洗下去没有关系,你的arg会剥落你的Ni,一般上柱子之前需要透析掉Arg。
13楼2013-05-23 10:18:49
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306495799

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by edoz1986 at 2013-05-23 10:03:18
复性液中有多少dtt?
复性是否成功呢?
可以取少量复性蛋白透析到8m尿素中再挂镍柱,看看是否挂。如果挂的话就是你的复性没成功,或者复性后你的6个his被折叠到分子内部去了。...

8M尿素岂不是又变性了吗?怎么能反映出复性的效果?求解?
也许似乎大概是,然而未必不见得
14楼2013-05-23 16:37:48
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306495799

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by stevenshi021 at 2013-05-23 10:18:49
这与你洗下去没有关系,你的arg会剥落你的Ni,一般上柱子之前需要透析掉Arg。

那我的柱子岂不是要再生才能使用啊
也许似乎大概是,然而未必不见得
15楼2013-05-23 16:38:20
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edoz1986

新虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 306495799 at 2013-05-23 16:37:48
8M尿素岂不是又变性了吗?怎么能反映出复性的效果?求解?...

取少量,只是为了验证
16楼2013-05-23 20:07:04
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929519755

金虫 (正式写手)

你变性的时候 为什么不用尿素?我不知道你的Ni-IDA是什么牌子的,我曾经用过国产的Ni-IDA用盐酸胍变性时发现Ni柱变颜色了,也未纯化到蛋白。最后发现,盐酸胍性质过于剧烈,国产的Ni-IDA受不了。建议用尿素作为变性剂……
想你没话说
17楼2013-08-16 10:49:45
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Allen206

银虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by edoz1986 at 2013-05-22 17:24:20
10mM dtt 上ni柱 天哪,ni 都被你dtt 还原了。一般2mm上镍柱的时候就会有影响。如果非要加入这么多的还原剂的话,建议用tcep  对柱子无伤害。

您好,请问tcep是什么?特殊填料么?
不想说什么,,,,
18楼2013-12-11 16:06:35
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Allen206

银虫 (小有名气)

DTT不行,太高了,用1MM
不想说什么,,,,
19楼2013-12-11 16:07:21
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glcmu

木虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by Allen206 at 2013-12-11 16:07:21
DTT不行,太高了,用1MM

你好,我的DTT就是1mM的,可是也出现问题了,刚平衡,组织就变颜色了,棕黄棕黄的,那柱子只有再生了?
20楼2014-06-18 15:21:11
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