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[求助]
求助分离纯化方法
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本人做的是放线菌发酵液胞外多糖的提取和分离纯化，试验流程是这样的：用黄豆培养基得到的发酵液上清减压浓缩，乙醇醇沉，分别得到上清1和沉淀1，乙醇醇沉完的上清液1再次甲醇醇沉，分别得上清2和沉淀2. 小老板之前做的是沉淀1中的多糖的提取，我也做过，做到后来发现没有活性，就没往后做。后来发现甲醇醇沉的沉淀2有活性。硫酸苯酚检测有糖的颜色反应，怀疑有一种低聚糖（分子量在1500以下），所以开始做的它的分离纯化。 目前做过各种方法纯化，DEAE-52，凝胶，阴阳离子交换树脂，大孔树脂，都没得到理想的结果。我的粗品易溶于水，不溶于丙酮和乙酸乙酯。而且拿凝胶收到的一部分不是很纯的组分点了硅胶G板在紫外365nm下中间是暗斑，只有最外面的边是荧光的，不知道怎么回事，是不纯的原因？同时也做了三氟乙酸的酸水解，发现120度12h很难水解，但是从液相上分析还是出现了一部分葡萄糖，另外就是我的那个组分峰和组分旁边的一个峰(怀疑是葡萄糖水解后留下来的那部分)。 在这里最困扰我的是培养基里的盐组分，总会干扰我样品的液相分析。因为用到的是海水晶，所以不知道会是什么盐最后在我的粗品里，而且由于样品分子量不大除盐很困难。因为刚开始接触分离纯化，不知道怎么解决，所以想请教一下这方面的高手，有什么比较好的方法来分离纯化出我想要的组分. |
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分离高手
新虫 (小有名气)
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1 2013-05-18 18:41:43
yvonne_mi(豆哥代发): 金币+8, 谢谢 2013-05-29 14:46:32
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yvonne_mi(豆哥代发): 金币+8, 谢谢 2013-05-29 14:46:32
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感觉你萝莉啰唆的做这么多试验，没有多少搞到正点上去啊。首先你开始处理样品就有问题，减压浓缩发酵液上清，并且是放线菌的发酵上清，温度多少啊，你的东西是不是会失去活性啊。你没有讲到你的活性是哪方面的活性，也不能给你建议是哪类物质了。根据你的描述感觉像是糖肽类的。 我给你两个实验思路看看行不行： 1、发酵液，微滤除菌体，5000分子量超滤除掉大分子蛋白（假设你的物质分子量在1500以下），纳滤收集活性物质。丙酮析晶两次看看纯度和活性。 2、发酵液微滤除菌体，HZ816吸附，SKI-20-4300离子交换层析介质分离纯化，纳滤除盐，丙酮析晶。 这样应该差不多了，感觉。先做下试验试试吧 |
2楼2013-05-18 13:30:28
