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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒转化
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
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20083630zhan(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-18 16:59:59
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10楼: Originally posted by 20083630zhan at 2013-05-15 22:10:27
我的基本上都是20h以后长出来的啊...

那基本上都是假阳性了，AMP在37度时间长了会失活，而且它只抑制菌生长而非杀死
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11楼2013-05-16 00:09:45
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 20083630zhan at 2013-05-15 20:53:33
但是我菌P的时候为什么会有我的目的条带啊？...

菌落PCR假阳性很多的，原因可能是因为你挑菌落时含有LB，而LB里面有PCR产物残留造成假阳性。。。等原因
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生物化学与分子生物学
12楼2013-05-16 08:27:42
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20083630zhan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by starseacow at 2013-05-16 00:09:45
那基本上都是假阳性了，AMP在37度时间长了会失活，而且它只抑制菌生长而非杀死...

嗯，受教了，谢谢了，那一般用的浓度是多少啊？大约长多长时间啊
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13楼2013-05-16 08:28:08
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 20083630zhan at 2013-05-15 20:55:06
我酶切回收后，跑过胶 ，有目的条带，然后我才做的连接啊...

能多试着做几个比例的连接反应
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生物化学与分子生物学
14楼2013-05-16 08:28:16
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by 20083630zhan at 2013-05-16 08:28:08
嗯，受教了，谢谢了，那一般用的浓度是多少啊？大约长多长时间啊...

Amp 在50%乙醇中配置母液，过滤除菌，-20度保存，使用时按1:1000加入灭菌后降温培养基中。倒好的平板4度保存，使用时不超过14小时。
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15楼2013-05-16 16:06:50
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20083630zhan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by starseacow at 2013-05-16 16:06:50
Amp 在50%乙醇中配置母液，过滤除菌，-20度保存，使用时按1:1000加入灭菌后降温培养基中。倒好的平板4度保存，使用时不超过14小时。...

AMP不用乙醇配置吧
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16楼2013-05-16 20:06:47
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
16楼: Originally posted by 20083630zhan at 2013-05-16 20:06:47
AMP不用乙醇配置吧...

Amp在水中溶解度可以达到50 mg/ml，我们使用的母液浓度是100 mg/ml，在50%乙醇中溶解效果好
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17楼2013-05-16 20:39:41
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)
水里100mg／ml也没问题，乙醇好处是不会结冰，坏处是挥发

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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20083630zhan
18楼2013-05-16 20:42:57
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zsewqa129

禁虫 (初入文坛)
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20083630zhan
19楼2013-05-17 11:38:40
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20083630zhan

木虫 (正式写手)
送红花一朵
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19楼: Originally posted by zsewqa129 at 2013-05-17 11:38:40
换了培养基，然后就正常了，当时我的也是长菌慢，菌斑少，提质粒没条带，菌P和用提的质粒做模板，条带都很亮，PCR测序也是目的片段的序列，菌液没测出来。...

可不可以说的详细一点啊，谢谢了
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20楼2013-05-17 15:19:06
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