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starseacow

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【答案】应助回帖


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20083630zhan(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-18 16:59:59
引用回帖:
10楼: Originally posted by 20083630zhan at 2013-05-15 22:10:27
我的基本上都是20h以后长出来的啊...

那基本上都是假阳性了,AMP在37度时间长了会失活,而且它只抑制菌生长而非杀死
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
11楼2013-05-16 00:09:45
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 20083630zhan at 2013-05-15 20:53:33
但是我菌P的时候为什么会有我的目的条带啊?...

菌落PCR假阳性很多的,原因可能是因为你挑菌落时含有LB,而LB里面有PCR产物残留造成假阳性。。。等原因
生物化学与分子生物学
12楼2013-05-16 08:27:42
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20083630zhan

木虫 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by starseacow at 2013-05-16 00:09:45
那基本上都是假阳性了,AMP在37度时间长了会失活,而且它只抑制菌生长而非杀死...

嗯,受教了,谢谢了,那一般用的浓度是多少啊?大约长多长时间啊
13楼2013-05-16 08:28:08
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 20083630zhan at 2013-05-15 20:55:06
我酶切回收后,跑过胶 ,有目的条带,然后我才做的连接啊...

能多试着做几个比例的连接反应
生物化学与分子生物学
14楼2013-05-16 08:28:16
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by 20083630zhan at 2013-05-16 08:28:08
嗯,受教了,谢谢了,那一般用的浓度是多少啊?大约长多长时间啊...

Amp 在50%乙醇中配置母液,过滤除菌,-20度保存,使用时按1:1000加入灭菌后降温培养基中。倒好的平板4度保存,使用时不超过14小时。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
15楼2013-05-16 16:06:50
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20083630zhan

木虫 (正式写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by starseacow at 2013-05-16 16:06:50
Amp 在50%乙醇中配置母液,过滤除菌,-20度保存,使用时按1:1000加入灭菌后降温培养基中。倒好的平板4度保存,使用时不超过14小时。...

AMP不用乙醇配置吧
16楼2013-05-16 20:06:47
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
16楼: Originally posted by 20083630zhan at 2013-05-16 20:06:47
AMP不用乙醇配置吧...

Amp在水中溶解度可以达到50 mg/ml,我们使用的母液浓度是100 mg/ml,在50%乙醇中溶解效果好
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
17楼2013-05-16 20:39:41
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

水里100mg/ml也没问题,乙醇好处是不会结冰,坏处是挥发

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

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18楼2013-05-16 20:42:57
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zsewqa129

禁虫 (初入文坛)

感谢参与,应助指数 +1
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19楼2013-05-17 11:38:40
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20083630zhan

木虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
19楼: Originally posted by zsewqa129 at 2013-05-17 11:38:40
换了培养基,然后就正常了,当时我的也是长菌慢,菌斑少,提质粒没条带,菌P和用提的质粒做模板,条带都很亮,PCR测序也是目的片段的序列,菌液没测出来。...

可不可以说的详细一点啊,谢谢了
20楼2013-05-17 15:19:06
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