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魏茂繁

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR

我的引物GC含量过高，Tm温度过高达到75度，那我该怎么办
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1楼 2013-05-15 13:34:21
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魏茂繁

新虫 (初入文坛)
急求
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2楼2013-05-15 13:35:07
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
魏茂繁(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-15 13:43:26
直接用72摄氏度退火延伸进行实验，也可能可以扩增出来

PCR体系加入 DMSO有利于高GC的扩增
DMSO is used in PCR to inhibit secondary structures in the DNA template or the DNA primers. It is added to the PCR mix before reacting, where it interferes with the self-complementarity of the DNA, preventing the occurrence of interfering reactions. However, use of DMSO in PCR increases the mutation rate. PCR体系中DMSO的量一般不超过总体积的4%。
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3楼2013-05-15 13:39:30
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魏茂繁

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wangpeng227 at 2013-05-15 13:39:30
直接用72摄氏度退火延伸进行实验，也可能可以扩增出来

PCR体系加入 DMSO有利于高GC的扩增
DMSO is used in PCR to inhibit secondary structures in the DNA template or the DNA primers. It is added to the  ...

72度不会太高吗，我看了好像说在5端加AT  请问怎么加
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4楼2013-05-15 13:41:48
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