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yongleixie

金虫 (正式写手)

[求助] FISH图片求助 已有1人参与

最近在做污水活性污泥中氨氮细菌的FISH,做出的图片感觉不是细菌的发光,哪位大侠帮忙看一下是不是目的细菌发光,还是污泥中的一些自发光或者是其他原因?

荧光图片.jpg



[ 来自科研家族 污水污泥家族 ]
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carlsnow

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
yongleixie: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-01-02 16:53:23
一般情况做FISH,你即便要看的是AOB,可能还是要做一个DAPI的染色(荧光显示所有微生物),这样在同一个视野下,根据不同荧光的强度比例,你可以分析在你的样品中,AOB占所有微生物的比重。
这张FISH图片,个人感觉可能有以下几个问题:
1. FISH引物不知道楼主用的是哪个序列,对于AOB的特异性如何,因为个人经验要是使用特异性针对AOB的探针,荧光强度或许没有那么高;
2. 可能是FISH的步骤中未杂交的探针没有有效洗脱,导致结果亮度过高;
3. 视野的选择不是很好,样品可能需要多稀释一下;
4. 显微镜的对焦需要微调一下。
2楼2014-01-02 16:24:28
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