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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 如何有效降低丝状真菌产抗生素过程中极易染菌的问题？
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海里的水泡

木虫 (小有名气)

[求助] 如何有效降低丝状真菌产抗生素过程中极易染菌的问题？

目前在做一种海洋丝状真菌的抗生素摇瓶发酵，由于该菌种子培养时间要4-5天，发酵时间要11天以上，做了很多批实验，大部分是染菌的。染菌的直接结果就是产量下降或者没有产量。在过程中镜检发现，在显微镜下菌丝和杂菌（主要是细菌）都有生长。
由于目前使用的天然培养基，所以培养基中有很多类似豆粉之类的固形物的存在。灭菌的时候已经额外延长了灭菌时间。
由于目前做不到很纯的液体种子，所以种子都是从固体平板上挑取单菌落来进行培养的。
不知道有没有什么比较好的方法能减少染菌几率?
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1楼 2013-05-10 13:17:26
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Andyllk

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+3, 鼓励回帖 2013-05-10 16:24:39
海里的水泡: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-05-12 01:52:08
1 好好对实验室消毒
2 注意无菌操作，特别是接种时瓶口不要和手，纱布接触。
3 天气热细菌生长快，适当降低温度。
4 可以加点氯霉素等抗菌素，但可能干扰你的产物检测。
另外你可以制成菌悬液接种看看是不是能缩短周期

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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

海里的水泡
2楼2013-05-10 14:00:49
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海里的水泡

木虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by Andyllk at 2013-05-10 14:00:49
1 好好对实验室消毒
2 注意无菌操作，特别是接种时瓶口不要和手，纱布接触。
3 天气热细菌生长快，适当降低温度。
4 可以加点氯霉素等抗菌素，但可能干扰你的产物检测。
另外你可以制成菌悬液接种看看是不是能缩 ...

1.实验室我只能尽可能控制洁净，毕竟别人还有做其它微生物的。
2.无菌操作的时候 接触瓶口很容易染菌吗？之前不是很注意这个。只是控制火焰周围。
3.这菌培养在25度，算是低温微生物了。
4.抗生素添加我在考虑，有什么好的建议吗？因为我产的是抗真菌的抗生素，对细菌没什么作用。
5.菌悬液没做过，有什么需要注意的地方吗？主要是我现在无法控制不染菌。。。
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3楼2013-05-10 14:42:43
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dayshow

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-05-10 22:31:55
海里的水泡: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-05-12 01:52:15
氯霉素加点，摇瓶还是发酵罐实验？摇瓶接种没染应该没多大问题，发酵罐的话，因素就多了

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4楼2013-05-10 18:27:19
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海里的水泡

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dayshow at 2013-05-10 18:27:19
氯霉素加点，摇瓶还是发酵罐实验？摇瓶接种没染应该没多大问题，发酵罐的话，因素就多了

摇瓶还可以控制一定比率不染，但是 做了几批发酵罐，无一幸免，全染菌。
加抗生素的话，会不会对杂菌产生抗性？我比较关心是否可以将添加抗生素作为常规的抑菌手段。
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5楼2013-05-10 22:55:57
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dayshow

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 海里的水泡 at 2013-05-10 22:55:57
摇瓶还可以控制一定比率不染，但是 做了几批发酵罐，无一幸免，全染菌。
加抗生素的话，会不会对杂菌产生抗性？我比较关心是否可以将添加抗生素作为常规的抑菌手段。...

菌种没带菌吧

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6楼2013-05-11 20:00:42
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海里的水泡

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by dayshow at 2013-05-11 20:00:42
菌种没带菌吧
...

我现在手上原始的菌种是别人那保藏的菌液。 自己目前用来传代什么的 都是用平板，因为是真菌，所以会长出很大的单菌落，没有在菌落附近观察到明显的染菌痕迹，镜检有的时候会发现有类似细菌的存在，难道我平板上观察到的形态是细菌和真菌的共生？之前做其它菌种的时候都没这么个染菌法，所以没遇到过类似情况，如果朋友你了解相关的情况，还望具体指点一下。
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7楼2013-05-12 01:50:34
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江湖笑

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
海里的水泡: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-05-14 09:57:44
建议做下菌种纯化吧，合适倍数下平板稀释涂布，挑单菌落摇瓶培养，菌落不需要长到很大，否则会偏老。培养基开始粘稠时保存到若干支到甘油管中，-20度保存，可以接发酵摇瓶验证种子。上罐的时候可以甘油管接种到种子瓶。进罐时可以按40mg/L发酵培养基的比例加过滤除菌的卡那霉素水溶液。

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8楼2013-05-13 17:14:33
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海里的水泡

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 江湖笑 at 2013-05-13 17:14:33
建议做下菌种纯化吧，合适倍数下平板稀释涂布，挑单菌落摇瓶培养，菌落不需要长到很大，否则会偏老。培养基开始粘稠时保存到若干支到甘油管中，-20度保存，可以接发酵摇瓶验证种子。上罐的时候可以甘油管接种到种子 ...

想咨询下加氨苄是不是也可以？
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9楼2013-05-14 09:59:38
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chshen06188

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
海里的水泡: 金币+2, ★有帮助 2013-05-15 19:34:17
有针对性地做一些对照空白试验来确定污染原因吧。
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竹杖芒鞋轻胜马，一蓑风雨任平生。
10楼2013-05-14 10:30:55
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