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lxdjxr

木虫 (小有名气)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 1553.4
帖子: 217
在线: 74.6小时
虫号: 174738
注册: 2006-01-22
性别: GG
专业: 微生物遗传育种学

[交流] iptg诱导表达的温度如何选择？

利用ＩＰＴＧ去诱导ＰＥＴ重组载体（已经连上目的基因）在BL21中进行表达，一般诱导温度选择多少？怎样来选择？请教各位虫虫

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1楼 2007-09-27 23:23:23

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Athenasun

应助: (幼儿园)
在线:
虫号: 413094

如果要大量可溶蛋白，应该做一个温度和时间梯度，如20，25，28，37等，诱导时间3h，5h，7h和过夜等，然后跑电泳看哪个条件下表达量大，一般低温过夜效果较好。

6楼2007-09-29 15:50:04

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guohuayin

木虫 (著名写手)

博士，副教授

应助: 23 (小学生)
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散金: 265
红花: 17
帖子: 1521
在线: 101.7小时
虫号: 219355
注册: 2006-03-13
性别: MM
专业: 植物病理学

★
johnsooh(金币+1,VIP+0):2楼说的不错,根据蛋白要求可以适当降低诱导温度

BL21的表达外源蛋白的诱导温度一般在37度，也就是大肠杆菌的最适生长温度，如果选择合适的诱导温度，主要是根军蛋白质的表达的多少来衡量，一般选择最适合蛋白质表达的温度也就是最佳的诱导温度。

赞一下(10人)

内生菌资源和核酸分子的利用

2楼2007-09-28 09:46:47

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xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU

BioEPI: 1
应助: 37 (小学生)
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红花: 7
帖子: 1319
在线: 561.7小时
虫号: 336444
注册: 2007-04-01
专业: 生物物理、生物化学与分子

37度比较常见吧，如果要纯化目的蛋白，而37度诱导时形成了包涵体，温度调低诱导可能会促成可溶性蛋白的形成。蛋白不同，最适表达的温度也有差异，可以设几个温度梯度表达，这样对比起来可能会更好地筛选，

活着就要让人感受到你的存在。

3楼2007-09-28 12:29:21

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沙砾

应助: (幼儿园)
在线:
虫号: 412653

我们有时候采用28度进行诱导，感觉表达量高一些。
这些条件，包括IPTG的用量都是要进行摸索的。

4楼2007-09-28 12:30:33

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