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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » iptg诱导表达的温度如何选择？
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lxdjxr

木虫 (小有名气)

[交流] iptg诱导表达的温度如何选择？

利用ＩＰＴＧ去诱导ＰＥＴ重组载体（已经连上目的基因）在BL21中进行表达，一般诱导温度选择多少？怎样来选择？请教各位虫虫
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1楼 2007-09-27 23:23:23
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guohuayin

木虫 (著名写手)

博士，副教授
★
johnsooh(金币+1,VIP+0):2楼说的不错,根据蛋白要求可以适当降低诱导温度
BL21的表达外源蛋白的诱导温度一般在37度，也就是大肠杆菌的最适生长温度，如果选择合适的诱导温度，主要是根军蛋白质的表达的多少来衡量，一般选择最适合蛋白质表达的温度也就是最佳的诱导温度。
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内生菌资源和核酸分子的利用
2楼2007-09-28 09:46:47
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xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU
37度比较常见吧，如果要纯化目的蛋白，而37度诱导时形成了包涵体，温度调低诱导可能会促成可溶性蛋白的形成。蛋白不同，最适表达的温度也有差异，可以设几个温度梯度表达，这样对比起来可能会更好地筛选，
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活着就要让人感受到你的存在。
3楼2007-09-28 12:29:21
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沙砾

我们有时候采用28度进行诱导，感觉表达量高一些。
这些条件，包括IPTG的用量都是要进行摸索的。
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4楼2007-09-28 12:30:33
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zhongdianshi

银虫 (小有名气)
每个蛋白不同，很难有通用的。
建议室温和37度，做时间曲线(0,1,3,5,过夜)，ITPG用0.2mM.
电泳检测。
引用回帖:
Originally posted by lxdjxr at 2007-9-27 11:23 PM:
利用ＩＰＴＧ去诱导ＰＥＴ重组载体（已经连上目的基因）在BL21中进行表达，一般诱导温度选择多少？怎样来选择？请教各位虫虫

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5楼2007-09-28 23:07:13
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Athenasun

如果要大量可溶蛋白，应该做一个温度和时间梯度，如20，25，28，37等，诱导时间3h，5h，7h和过夜等，然后跑电泳看哪个条件下表达量大，一般低温过夜效果较好。
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6楼2007-09-29 15:50:04
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