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念独boy

木虫 (著名写手)

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[交流] 壳聚糖纳米粒透射观察-负染和不染（磷钨酸）的差别？

如题：
在壳聚糖纳米粒的透射观察中，有的文献有进行磷钨酸负染，有的没有；
得出来的结果规律一般是这样的：有负染的壳聚糖纳米粒表现为白色点，没有负染的壳聚糖表现为黑色点。请问这个有什么差别吗？到底为什么会这样子呢？求解额，求助呀！

下面列出相关依据：
白色点：
载基因壳聚糖纳米粒的初步研究四川大学硕士论文 2005；
低分子量壳聚糖纳米粒的制备及其体内分布研究

黑色点：
载蛋白三甲基壳聚糖纳米粒口服给药系统的研究
载SurvivinsiRNA的壳聚糖及水溶性壳聚糖纳米粒的制备_鉴定及生物活性研重庆大学

还有，大家购买的磷钨酸影响大吗？一般在哪买，是比较好的用来做TEM负染观察的呢？求商家！

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1楼 2013-05-03 22:40:05

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papaverme

铁杆木虫 (正式写手)

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★
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磷钨酸用水或磷酸缓冲液配制成1％左右的溶液，用滴管一滴染色液在制好样品的铜网上，1～2分钟后，用剪成尖角的滤纸吸去染色液。再滴一滴纯水在铜网上，用滤纸吸去，反复两三次，这样是为了洗去多余的磷钨酸，然后静置干燥。然后就可以用电镜观察了。

磷钨酸中的重原子相对于有机分子中的碳氢氧氮等轻原子来说，更能阻挡（散射）电子。所以，有磷钨酸吸附（或沉积）的地方在TEM照片中看起来更黑，而有机物占据的地方看起来更亮。之所以叫“负染色”，就是因为被染“黑”的是背景和外轮廓，真正感兴趣的样品部分是“白”的。也就是说，典型的经过负染色的样品是表现为黑背景中的白区。

一般有机物并不与磷钨酸发生反应，磷钨酸只是沉积在有机物周围形成“背景”或“轮廓”。但是不是所有的磷钨酸染色都是负染色。有一些羟基和酰胺类会与磷钨酸作用，出现正染色的效果，即有些含有这些基团的有机物在TEM下看起来被染“黑”，最典型的是尼龙。

另外，有时候不成功的负染色，看到的结果也是“白底黑点”，其实虽然是做了染色的操作，但可能由于方法不对，或者样品本身的性质不适用负染色，结果跟没染是一样的。如果有机颗粒足够大，不染色时就能看到“白底黑点”。

另一方面，如果染色很弱，一般只是给有机颗粒镶上一个轮廓，如果染色剂量很大，则会出现很黑的“背景”。因此，对于很小的有机颗粒，如果染色很弱，只是一个轮廓圈，电镜放大倍数不够的时候，看起来就是一个小黑点了。就好像一个纸上画一个空心圈，站远了看也可能成一个小黑点。

楼主前面提到的“白底黑点”是哪一种情况，我这里看不到文献就不妄议了。

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12楼2013-05-09 23:02:49

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念独boy

木虫 (著名写手)

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但是也有用磷钨酸染色后，壳聚糖纳米粒时黑色点的额：

Liu H, Gao C. Preparation and properties of ionically cross-linked chitosan nanoparticles[J]. Polymers for Advanced Technologies, 2009, 20: 613-619.

什么情况呢？求教！

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2楼2013-05-03 23:29:16

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