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壳聚糖纳米粒透射观察-负染和不染（磷钨酸）的差别？
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如题： 在壳聚糖纳米粒的透射观察中，有的文献有进行磷钨酸负染，有的没有； 得出来的结果规律一般是这样的：有负染的壳聚糖纳米粒表现为白色点，没有负染的壳聚糖表现为黑色点。请问这个有什么差别吗？到底为什么会这样子呢？求解额，求助呀！ 下面列出相关依据： 白色点： 载基因壳聚糖纳米粒的初步研究 四川大学硕士论文 2005； 低分子量壳聚糖纳米粒的制备及其体内分布研究 黑色点： 载蛋白三甲基壳聚糖纳米粒口服给药系统的研究 载SurvivinsiRNA的壳聚糖及水溶性壳聚糖纳米粒的制备_鉴定及生物活性研 重庆大学 还有，大家购买的磷钨酸影响大吗？一般在哪买，是比较好的用来做TEM负染观察的呢？求商家！ |
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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磷钨酸用水或磷酸缓冲液配制成1％左右的溶液，用滴管一滴染色液在制好样品的铜网上，1～2分钟后，用剪成尖角的滤纸吸去染色液。再滴一滴纯水在铜网上，用滤纸吸去，反复两三次，这样是为了洗去多余的磷钨酸，然后静置干燥。然后就可以用电镜观察了。 磷钨酸中的重原子相对于有机分子中的碳氢氧氮等轻原子来说，更能阻挡（散射）电子。所以，有磷钨酸吸附（或沉积）的地方在TEM照片中看起来更黑，而有机物占据的地方看起来更亮。之所以叫“负染色”，就是因为被染“黑”的是背景和外轮廓，真正感兴趣的样品部分是“白”的。也就是说，典型的经过负染色的样品是表现为黑背景中的白区。 一般有机物并不与磷钨酸发生反应，磷钨酸只是沉积在有机物周围形成“背景”或“轮廓”。但是不是所有的磷钨酸染色都是负染色。有一些羟基和酰胺类会与磷钨酸作用，出现正染色的效果，即有些含有这些基团的有机物在TEM下看起来被染“黑”，最典型的是尼龙。 另外，有时候不成功的负染色，看到的结果也是“白底黑点”，其实虽然是做了染色的操作，但可能由于方法不对，或者样品本身的性质不适用负染色，结果跟没染是一样的。如果有机颗粒足够大，不染色时就能看到“白底黑点”。 另一方面，如果染色很弱，一般只是给有机颗粒镶上一个轮廓，如果染色剂量很大，则会出现很黑的“背景”。因此，对于很小的有机颗粒，如果染色很弱，只是一个轮廓圈，电镜放大倍数不够的时候，看起来就是一个小黑点了。就好像一个纸上画一个空心圈，站远了看也可能成一个小黑点。 楼主前面提到的“白底黑点”是哪一种情况，我这里看不到文献就不妄议了。 |
12楼2013-05-09 23:02:49
2楼2013-05-03 23:29:16
科研，科研，科研，努力科研，成果会有时……！
3楼2013-05-04 00:14:08
4楼2013-05-04 10:09:27