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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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念独boy

木虫 (著名写手)


[交流] 壳聚糖纳米粒透射观察-负染和不染(磷钨酸)的差别?

如题:
在壳聚糖纳米粒的透射观察中,有的文献有进行磷钨酸负染,有的没有;
得出来的结果规律一般是这样的:有负染的壳聚糖纳米粒表现为白色点,没有负染的壳聚糖表现为黑色点。请问这个有什么差别吗?到底为什么会这样子呢?求解额,求助呀!

下面列出相关依据:
白色点:
载基因壳聚糖纳米粒的初步研究 四川大学硕士论文 2005;
低分子量壳聚糖纳米粒的制备及其体内分布研究

黑色点:
载蛋白三甲基壳聚糖纳米粒口服给药系统的研究
载SurvivinsiRNA的壳聚糖及水溶性壳聚糖纳米粒的制备_鉴定及生物活性研 重庆大学

还有,大家购买的磷钨酸影响大吗?一般在哪买,是比较好的用来做TEM负染观察的呢?求商家!
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papaverme

铁杆木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
磷钨酸用水或磷酸缓冲液配制成1%左右的溶液,用滴管一滴染色液在制好样品的铜网上,1~2分钟后,用剪成尖角的滤纸吸去染色液。再滴一滴纯水在铜网上,用滤纸吸去,反复两三次,这样是为了洗去多余的磷钨酸,然后静置干燥。然后就可以用电镜观察了。

磷钨酸中的重原子相对于有机分子中的碳氢氧氮等轻原子来说,更能阻挡(散射)电子。所以,有磷钨酸吸附(或沉积)的地方在TEM照片中看起来更黑,而有机物占据的地方看起来更亮。之所以叫“负染色”,就是因为被染“黑”的是背景和外轮廓,真正感兴趣的样品部分是“白”的。也就是说,典型的经过负染色的样品是表现为黑背景中的白区。

一般有机物并不与磷钨酸发生反应,磷钨酸只是沉积在有机物周围形成“背景”或“轮廓”。但是不是所有的磷钨酸染色都是负染色。有一些羟基和酰胺类会与磷钨酸作用,出现正染色的效果,即有些含有这些基团的有机物在TEM下看起来被染“黑”,最典型的是尼龙。

另外,有时候不成功的负染色,看到的结果也是“白底黑点”,其实虽然是做了染色的操作,但可能由于方法不对,或者样品本身的性质不适用负染色,结果跟没染是一样的。如果有机颗粒足够大,不染色时就能看到“白底黑点”。

另一方面,如果染色很弱,一般只是给有机颗粒镶上一个轮廓,如果染色剂量很大,则会出现很黑的“背景”。因此,对于很小的有机颗粒,如果染色很弱,只是一个轮廓圈,电镜放大倍数不够的时候,看起来就是一个小黑点了。就好像一个纸上画一个空心圈,站远了看也可能成一个小黑点。

楼主前面提到的“白底黑点”是哪一种情况,我这里看不到文献就不妄议了。
12楼2013-05-09 23:02:49
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奥特馒

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
内容已删除
15楼2013-05-10 00:52:06
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普通回帖

念独boy

木虫 (著名写手)


但是也有用磷钨酸染色后,壳聚糖纳米粒时黑色点的额:

Liu H, Gao C. Preparation and properties of ionically cross-linked chitosan nanoparticles[J]. Polymers for Advanced Technologies, 2009, 20: 613-619.


什么情况呢?求教!
2楼2013-05-03 23:29:16
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gzl9901

铁杆木虫 (文坛精英)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
科研,科研,科研,努力科研,成果会有时……!
3楼2013-05-04 00:14:08
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念独boy

木虫 (著名写手)


引用回帖:
3楼: Originally posted by gzl9901 at 2013-05-04 00:14:08
科研,科研,科研,努力科研,成果会有时……!

你知道这个原因吗?求解
4楼2013-05-04 10:09:27
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念独boy

木虫 (著名写手)


等候大侠们回答哈!谢谢
5楼2013-05-04 16:39:21
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念独boy

木虫 (著名写手)


顶顶....
6楼2013-05-04 20:37:29
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papaverme

铁杆木虫 (正式写手)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
念独boy: 金币+1 2013-05-09 01:08:10
建议直接上图,方便讨论。
应该是跟颗粒尺寸和染色程度有关的。
7楼2013-05-05 00:10:04
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念独boy

木虫 (著名写手)


引用回帖:
7楼: Originally posted by papaverme at 2013-05-05 00:10:04
建议直接上图,方便讨论。
应该是跟颗粒尺寸和染色程度有关的。

文献里都有图哈,我一个个上,量太多了额。。。哎...头都大了。你做过该测试吗?怎么样
8楼2013-05-05 09:08:16
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念独boy

木虫 (著名写手)


引用回帖:
7楼: Originally posted by papaverme at 2013-05-05 00:10:04
建议直接上图,方便讨论。
应该是跟颗粒尺寸和染色程度有关的。

颗粒尺寸会影响?然后变成白色或黑色吗?求解哈
9楼2013-05-09 01:08:47
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唐伯虎点盘香

木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
帮顶,我也正要问,,很多都是用磷钨酸染色的。。有人告诉我说 像这些有机物,如果不用染色的话 是看不出来的,具体也不太懂
10楼2013-05-09 10:57:20
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念独boy

木虫 (著名写手)


引用回帖:
10楼: Originally posted by 唐伯虎点盘香 at 2013-05-09 10:57:20
帮顶,我也正要问,,很多都是用磷钨酸染色的。。有人告诉我说 像这些有机物,如果不用染色的话 是看不出来的,具体也不太懂

那你试过了吗?可以试试哈。
11楼2013-05-09 13:05:54
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papaverme

铁杆木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
如果颗粒够大,其实不一定需要负染色。跟电镜的性能和操作者的水平也有关系的。先试试看吧。
13楼2013-05-09 23:05:12
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奥特馒

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
在google图片上搜了下,好像染后黑的白的都有,http://www.google.pl/search?um=1 ... sphotungstic%20acid
14楼2013-05-10 00:47:45
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念独boy

木虫 (著名写手)


引用回帖:
15楼: Originally posted by 奥特馒 at 2013-05-10 00:52:06
估计离子交联的壳聚糖结构松散,染色剂容易进去,粒子就是黑的,有的乳液法做的或者交联紧密,染色剂进不去,相对背景来说粒子就是白的...

这个有点新意,呵呵,也许吧!你做这方面的吗?
16楼2013-05-10 09:06:37
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007李雪云

银虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我是新手,也在做TEM用磷钨酸染色,看了大神们的回复,很是受教啊,发帖表示感谢!!!
17楼2015-07-13 17:08:58
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