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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 圆二色谱 蛋白质浓度
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寒江雪0623

铜虫 (初入文坛)

[求助] 圆二色谱 蛋白质浓度

我用圆二色谱测蛋白质浓度，实验的师兄说蛋白浓度必须是0.1mg/ml，正负偏差0.01，我用BCA试剂盒、A280测的蛋白浓度，去了两次，每次信号都很低，各位大神有用过圆二色谱测蛋白二级结构的吗？蛋白浓度真的要求那么严格吗，必须0.1！！！
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QQ:626172471
1楼 2013-05-01 19:44:44
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proteincd

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

要测到准确的蛋白质CD谱， 要同时看一看吸收谱， 吸收值最好在 0.5-2.0 之间， 这是最主要的参照标准， 对浓度没有必然的规定， 常见的经验值为浓度在0.1-1.0 mg/ml 之间， 也可以更低或更高。 所以你先测一下紫外吸收值absorbance . 如果CD信号值太低， 可能需要提高它才能得到有合理信噪比的信号值。 如果你的buffer 背景吸收值不大， 也可以用大的光程如5mm , 10mm 的样品池比色皿。
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5楼2013-05-04 21:59:11
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小鬼浅夏

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
寒江雪0623(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-05-02 12:02:16
不是啊，浓度低测不到信号，浓度高，就会超过电压，这个浓度可以根据自己图的要求进行调节，比如要求同样的紫外吸收等。不知道你师兄要求0.1是因为其他实验也用了这个浓度，所以要保持一致，还是？
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2楼2013-05-02 08:26:54
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寒江雪0623

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小鬼浅夏 at 2013-05-02 08:26:54
不是啊，浓度低测不到信号，浓度高，就会超过电压，这个浓度可以根据自己图的要求进行调节，比如要求同样的紫外吸收等。不知道你师兄要求0.1是因为其他实验也用了这个浓度，所以要保持一致，还是？

他要求0.1 是因为其他的人做实验都是这个浓度，这个浓度下测最好，可我的怎么就信号很低呢，是不是跟材料有关呀
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QQ:626172471
3楼2013-05-02 11:10:47
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
CD做蛋白质二级结构，你应该用的浓度取决于你用的比色皿的pathlength了。
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4楼2013-05-03 09:23:55
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