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寒江雪0623

铜虫 (初入文坛)

[求助] 圆二色谱 蛋白质浓度

我用圆二色谱测蛋白质浓度,实验的师兄说蛋白浓度必须是0.1mg/ml,正负偏差0.01,我用BCA试剂盒、A280测的蛋白浓度,去了两次,每次信号都很低,各位大神有用过圆二色谱测蛋白二级结构的吗?蛋白浓度真的要求那么严格吗,必须0.1!!!
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proteincd

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

要测到准确的蛋白质CD谱, 要同时看一看吸收谱, 吸收值最好在 0.5-2.0 之间, 这是最主要的参照标准, 对浓度没有必然的规定, 常见的经验值为浓度在0.1-1.0 mg/ml 之间, 也可以更低或更高。 所以你先测一下紫外吸收值absorbance . 如果CD信号值太低, 可能需要提高它才能得到有合理信噪比的信号值。 如果你的buffer 背景吸收值不大, 也可以用大的光程如5mm , 10mm 的样品池比色皿。
5楼2013-05-04 21:59:11
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小鬼浅夏

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
寒江雪0623(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,鼓励应助,分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-05-02 12:02:16
不是啊,浓度低测不到信号,浓度高,就会超过电压,这个浓度可以根据自己图的要求进行调节,比如要求同样的紫外吸收等。不知道你师兄要求0.1是因为其他实验也用了这个浓度,所以要保持一致,还是?
2楼2013-05-02 08:26:54
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寒江雪0623

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小鬼浅夏 at 2013-05-02 08:26:54
不是啊,浓度低测不到信号,浓度高,就会超过电压,这个浓度可以根据自己图的要求进行调节,比如要求同样的紫外吸收等。不知道你师兄要求0.1是因为其他实验也用了这个浓度,所以要保持一致,还是?

他要求0.1 是因为其他的人做实验都是这个浓度,这个浓度下测最好,可我的怎么就信号很低呢,是不是跟材料有关呀
QQ:626172471
3楼2013-05-02 11:10:47
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
CD做蛋白质二级结构,你应该用的浓度取决于你用的比色皿的pathlength了。
4楼2013-05-03 09:23:55
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