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snowhite1990

新虫 (初入文坛)

[求助] 抗植物病原真菌的细菌胞外活性物质分离

本人小菜鸟一枚，刚分离到一株有抑制稻瘟病菌的细菌，接下来想分离其活性物质，看过一些论文，有先盐析，然后做层析神马的，可我还是不太知道怎么做，有没有高手请教下，最好有具体的方法步骤奥~
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1楼 2013-04-27 16:32:33
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gengning0427

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhangxingc: 金币+1, 欢迎常到微生物版 2013-04-28 10:00:09
snowhite1990: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-05-16 09:08:40
了解抑菌物质的性质么？给LZ一条路~~~先做酸碱沉淀，没有沉淀下来的话，再实验有机萃取，盐析也是一种办法，不过只是针对蛋白类物质的，LZ也可以实验下。层析是后续纯化的工作了。没有具体点的性质 ，不可能给出你具体步骤的
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戒掉安逸 多逼逼自己
2楼2013-04-28 09:14:42
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snowhite1990

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gengning0427 at 2013-04-28 09:14:42
了解抑菌物质的性质么？给LZ一条路~~~先做酸碱沉淀，没有沉淀下来的话，再实验有机萃取，盐析也是一种办法，不过只是针对蛋白类物质的，LZ也可以实验下。层析是后续纯化的工作了。没有具体点的性质 ，不可能给出你具 ...

谢谢您的回答，那么假如我大胆假设其是蛋白质呢，后续纯化该怎么做呢？
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3楼2013-04-28 13:49:40
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gengning0427

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by snowhite1990 at 2013-04-28 13:49:40
谢谢您的回答，那么假如我大胆假设其是蛋白质呢，后续纯化该怎么做呢？...

那就好办了~~首先确定最好的硫酸铵沉淀浓度，沉淀下来以后用透析除去硫酸铵，然后用分子筛层析，柱子你可以选个合适大小的，试过就知道了，分子筛以后你摸索下它的等电点，是蛋白总会有的，然后用离子吸附层析进一步纯化，浓缩管浓缩一下，跑SDS-page电泳了解它的大小、、、需要做很久的~~许多条件都需要慢慢摸索的
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戒掉安逸 多逼逼自己
4楼2013-04-28 15:20:20
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jpp9898

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我猜你是做细菌的活性成分的，这个还是比较难做的，而且变化的情况比较多，你可以看到不管是中文还是英文文献，上面分到的物质很大的一部分是脂肽类的，或是蛋白质的，分离非常困难，而且确定结构也很复杂，需要实验室有很强的基础，要不然别说你分不到，就算是你分到了，你也不一定能发一篇很好的文章！因为我做过细菌的活性成分，也分过真菌的活性成分，故此建议一下，不知道对你有没有帮助！
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梦想有多大，舞台就有多大
5楼2013-04-30 14:11:21
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snowhite1990

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gengning0427 at 2013-04-28 15:20:20
那就好办了~~首先确定最好的硫酸铵沉淀浓度，沉淀下来以后用透析除去硫酸铵，然后用分子筛层析，柱子你可以选个合适大小的，试过就知道了，分子筛以后你摸索下它的等电点，是蛋白总会有的，然后用离子吸附层析进一 ...

前几天出去啦，刚看到您的回复，谢谢您的建议~对我帮助很大~
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6楼2013-05-09 17:15:12
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snowhite1990

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jpp9898 at 2013-04-30 14:11:21
我猜你是做细菌的活性成分的，这个还是比较难做的，而且变化的情况比较多，你可以看到不管是中文还是英文文献，上面分到的物质很大的一部分是脂肽类的，或是蛋白质的，分离非常困难，而且确定结构也很复杂，需要实验 ...

哎，那我也要继续做呀，谁让我已经选择做这个了，问题是我不知道接下来要怎么做呐
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7楼2013-05-09 17:23:41
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