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zy晨曦

新虫 (小有名气)

[求助] PCR求助

3400bp的基因PCR时怎样设定程序，尤其是延伸的时间？因平时没有扩过这么长的，没有经验，求指教
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日事日毕，日清日高
1楼 2013-04-24 08:27:47
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

tianyinghu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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zy晨曦: 金币+1, ★有帮助 2013-04-24 13:14:37
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-24 19:26:26
gyesang: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-04-24 19:52:41
看你用什么酶。假如这个酶说1分钟1KB，那你最好设个4分钟。3400bp的片段建议你用KOD酶比较好。
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2楼2013-04-24 09:18:54
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greenygreen

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zy晨曦: 金币+1, ★有帮助 2013-04-24 18:53:30
myprayer: 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-24 19:26:37
我PCR过3800bp多的，用的全式金的fastpfu，高保真，扩增快速，至少1000bp/1min，你扩3400的设置四分钟足够。程序就按照说明书上要求的去做就没问题。
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8楼2013-04-24 17:04:10
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普通回帖

zhlf1989513

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zy晨曦: 金币+1, ★有帮助 2013-04-24 13:14:49
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-04-24 20:00:50
建议楼主用高保真的酶，不容易发生突变，一般的Taq酶p这么长的片段容易发生突变。。。。
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keepon
3楼2013-04-24 09:37:22
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
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zy晨曦: 金币+1, ★有帮助 2013-04-24 13:15:03
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-04-24 19:53:15
延伸时间根据选择的酶不同，参考选取的DNA聚合酶使用说明书。3.4kb最好用高保真酶扩增。
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4楼2013-04-24 13:02:21
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zy晨曦

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2013-04-24 09:37:22
建议楼主用高保真的酶，不容易发生突变，一般的Taq酶p这么长的片段容易发生突变。。。。

好的，谢谢
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日事日毕，日清日高
5楼2013-04-24 13:12:47
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zy晨曦

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tianyinghu at 2013-04-24 09:18:54
看你用什么酶。假如这个酶说1分钟1KB，那你最好设个4分钟。3400bp的片段建议你用KOD酶比较好。

非常感谢！
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日事日毕，日清日高
6楼2013-04-24 13:13:24
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zy晨曦

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-24 13:02:21
延伸时间根据选择的酶不同，参考选取的DNA聚合酶使用说明书。3.4kb最好用高保真酶扩增。

谢谢！
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日事日毕，日清日高
7楼2013-04-24 13:13:51
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zy晨曦

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by greenygreen at 2013-04-24 17:04:10
我PCR过3800bp多的，用的全式金的fastpfu，高保真，扩增快速，至少1000bp/1min，你扩3400的设置四分钟足够。程序就按照说明书上要求的去做就没问题。

谢谢指教
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日事日毕，日清日高
9楼2013-04-24 18:53:42
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baseball

禁虫 (初入文坛)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
10楼2013-04-24 23:44:04
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