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xiong-y-x

金虫 (正式写手)

[求助] 量子点荧光共振能量转移

各位虫虫们，急求啊 我现在发现一个实验问题 如果解决不了 我就没法做了，具体是这样的 ，我用量子点和标记有cy5染料的DNA做荧光信号，参考文献，如果单独混合，应该有两个峰或者一个峰，一个峰应该是量子点的，可是我单独混合后发现量子点的峰不见了，只有cy5染料的峰，不合理啊，不可能发生荧光共振能量转移啊 我还没有将量子点和标记cy5的DNA连接起来，按理说距离应该很远，根本不会发生荧光共振能量转移啊，如果是量子点浓度小了，或者cy5浓度大了，也不会发生这种奇怪的变化啊，量子点的荧光不应该减弱的，除非发生看荧光共振能量转移，但理论上是不会的，所以请做相关实验的虫虫给些宝贵的建议啊 万分感激 帮忙的虫虫金币一定奉上！
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1楼 2013-04-23 14:16:37
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xiong-y-x

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xugehui at 2013-04-23 19:42:38
你设定的激发波长是多少？

350，我测了一下量子点紫外吸收在548，但是用这个激发没有350的激发强，所以我就一直用350激发，我也不知道怎么回事，这个激发波长有影响吗

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2013-04-23 23:03:38
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xiong-y-x

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yz2007433052 at 2013-04-24 08:40:16
你重新看看你的链吧 还有 不清楚你的DNA有多少碱基。。。碱基数量少的话 也是不行的 还有 有一种可能是你的量子点直接把你的链给吸附了 你用的水溶性的量子点 不清楚你的量子点外边包着什么东西~~

我也是看文献做的 我的cy5连的是12个碱基，少了会有什么影响啊 是容易吸附量子点吗，我的量子点没包裹什么 就是修饰羧基的
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6楼2013-04-24 12:38:26
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xiong-y-x

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xugehui at 2013-04-24 09:29:51
在350激发，正常情况下是不会有Cy5的发射峰，但是在700左右会有一个倍频峰。你再看看你的实验方案，然后换一个长一点的激发波长试试看能不能有量子点的发射峰。...

我也觉得奇怪 但的确是有cy5的峰 我的实验方案前面的应没什么问题啊，今天换了激发扫 也是一样的，没有峰，我就降低了cy5- DNA的浓度，结果cy5的峰是没了，也有量子点的峰可是量子点的峰还是会减小，而且减的还挺多的，这个我真的不知道怎么解释，直接混合，应该量子点的峰强不会有多大变化的吧 除非和cy5-DNA间发生了一些相互作用
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7楼2013-04-24 12:43:50
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xiong-y-x

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xugehui at 2013-04-24 13:05:43
我也做过类似的实验，没有出现您所说的情况，唉，这个确实够纠结的。不好意思，帮不到你了。如果这个问题解决了，可以给我传授点经验。另外，你确定一下 量子点的荧光强度的减少是否是因为激发波长的变化，或者是因 ...

这个一批扫的话 我的量和激发肯定是一样的啊 单独的也扫过的 单独cy5的溶液的荧光要比混合后强一点 我看文献中也没有比较量子点和量子点加cy5的峰强度的变化，是不是说这个现象是确实存在的，只要不影响后续试验就行了 我具体也不清楚，我想拍个电镜看看到底量子点有没有什么形态的变化
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11楼2013-04-24 14:51:52
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xiong-y-x

金虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by yz2007433052 at 2013-04-24 17:52:03
还有还有 ph值~~~...

用MPA啊 就是巯基丙酸包裹的啊 所以在水中有很好的水溶性，链长的了的话对我的体系不行啊 我看文献也有十几个碱基的啊 pH值影响大吗 我差不多在7点几的缓冲环境中做的 这个应该没什么影响的啊
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15楼2013-04-24 18:11:07
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xiong-y-x

金虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by yz2007433052 at 2013-04-25 09:38:42
按理来说应该没什么问题啊。。。。介个我就真不知道了 师兄只能帮你到这儿了。。。...

好吧 那还是谢谢了
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17楼2013-04-25 10:29:22
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