应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 构建载体很久了就是不长斑，急急急！！！
242/3返回列表上一页123下一页
查看: 1820  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jiangyhai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

目的片段酶切有问题。
赞一下 回复此楼
静心做事。
11楼2013-04-24 07:58:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-04-28 13:52:03
回收之后，测一下浓度，然后按mol浓度载体比目的1：3-10连接，10ul连接产物全部加入感受态里转化。同时做一个质粒转化同样的感受态做阳性对照，做一个只涂感受态的阴性对照。另外可以用T4 DNA 连接酶做一下，看是不是solution1是不是失效了。
赞一下 回复此楼
12楼2013-04-24 09:57:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

带刺毛毛虫

银虫 (小有名气)
★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-04-28 13:52:22
引用回帖:
9楼: Originally posted by zsewqa129 at 2013-04-23 20:03:05
摩尔比怎么算呀，呵呵，这个不懂...

举个例子
同样100毫克的DNA
载体5000bp   目的片段500bp
摩尔比     载体：目的片段=1:10
赞一下(1人) 回复此楼
加油
13楼2013-04-24 15:27:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zsewqa129

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
14楼2013-04-25 16:57:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zsewqa129

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
15楼2013-04-25 17:05:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zsewqa129

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
16楼2013-04-25 17:11:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XOooZzz

银虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-04-28 13:52:36
由于不了解情况，根据lz提供的信息，只能猜测是否是以下原因：
1、回收是否有问题？看回收后的胶，目的片段涂抹，没有带。
2、载体和目的片段是否加够量？可以这样估算：在10uL体系里，载体加（长度/100）ng=70ng，目的片段加（长度/10）ng=50ng。这个比较粗放，差个一两倍没关系，东西多就多加点，少就少加点。DNA的浓度用分光光度计测，对于普通的光度计，回收后取1uL稀释到100uL测吸光。
3、载体或者片段自身没问题？要来的载体（尤其是国内的）实际序列常常和图谱不一样。你以为酶切位点是HindIII-NNNNN-SalI，实际它是HindIII-NNNNN-SalI-HindII。
4、HindIII和SalI之间的是什么序列，会不会关系到质粒自身的生死存亡？
5、你的目的片段是怎么来的？PCR产物？有保护碱基没有？
赞一下 回复此楼
17楼2013-04-25 22:50:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bloodwar

银虫 (小有名气)
感觉模板量好少啊
赞一下 回复此楼
18楼2013-04-26 09:54:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zsewqa129

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
19楼2013-04-28 08:40:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zsewqa129

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
20楼2013-04-28 08:42:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zsewqa129 的主题更新
242/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭