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zsewqa129

禁虫 (初入文坛)

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XOooZzz

银虫 (小有名气)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-04-28 13:52:36
由于不了解情况,根据lz提供的信息,只能猜测是否是以下原因:
1、回收是否有问题?看回收后的胶,目的片段涂抹,没有带。
2、载体和目的片段是否加够量?可以这样估算:在10uL体系里,载体加(长度/100)ng=70ng,目的片段加(长度/10)ng=50ng。这个比较粗放,差个一两倍没关系,东西多就多加点,少就少加点。DNA的浓度用分光光度计测,对于普通的光度计,回收后取1uL稀释到100uL测吸光。
3、载体或者片段自身没问题?要来的载体(尤其是国内的)实际序列常常和图谱不一样。你以为酶切位点是HindIII-NNNNN-SalI,实际它是HindIII-NNNNN-SalI-HindII。
4、HindIII和SalI之间的是什么序列,会不会关系到质粒自身的生死存亡?
5、你的目的片段是怎么来的?PCR产物?有保护碱基没有?
17楼2013-04-25 22:50:36
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sl35537417

木虫 (正式写手)

一步步地确定 就会找到问题
2楼2013-04-19 09:29:25
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带刺毛毛虫

银虫 (小有名气)

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感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励虫子来到生物版块交流,期待你的精彩1 2013-04-23 21:00:56
酶切你切的是什么?注意以下链接比例,小片段:大片段=3-10:1,体系不要大
加油
3楼2013-04-19 09:30:43
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励虫子来到生物版块交流,期待你的精彩1 2013-04-23 21:01:06
每一步的图片发过来看看 ,你回收的怎么样?酶切的怎么样?连接体系是什么?转化过程是什么?每一步都说清楚,这样才可能分析原因。
4楼2013-04-19 11:34:06
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