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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » [交流求助]CTAB法提DNA出现问题
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xuuue

[交流] [交流求助]CTAB法提DNA出现问题

小生用CTAB法提植物叶片DNA，用乙醇沉淀DNA时，除了絮状沉淀外，还出现大量碎末状沉淀，不知道是什么东西？恳请各位大虾不吝赐教。
    提取液中氯化钠的浓度为2M，以前1.4M时也有这种情况出现，不知道是不是盐离子浓度太大的原因。
    先谢谢各位了。
[search]提取DNA[/search]
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1楼 2007-09-18 21:24:26
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xuuue

★
plantsoil(金币+1,VIP+0):呵呵，反馈很重要
经过试验，是盐离子浓度太大了。
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2楼2007-09-21 07:50:52
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runrunrun

金虫 (正式写手)
哥们是如何 验证的,到底多少浓度才算适合?
我也正在提
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3楼2007-09-21 13:57:08
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jjg0912

木虫 (正式写手)
碎沫状沉淀是DNA还是蛋白?
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4楼2007-09-23 15:41:26
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guohuayin

木虫 (著名写手)

博士，副教授
★ ★
johnsooh(金币+1,VIP+0):thx
plantsoil(金币+1,VIP+0):补充奖励
我觉得碎末状沉淀是你没有去除干净的蛋白质，在苯酚－氯仿重提阶段，建议不要为了获取大量的的DNA而将中间的那层吸出来，那层是蛋白质，吸取上清液的时候，在最后快要吸完的时候，最好不要继续吸出了，防止蛋白质污染。
     建议你用苯酚－氯仿抽提一次，再用氯仿：异戊醇抽提一次。
并且用70％的酒精多洗涤几次，酒精洗涤的作用主要是去除盐分。最后酒精洗涤完后，一定要晾干后再用适量的双蒸水溶解或者TE缓冲液溶解。
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内生菌资源和核酸分子的利用
5楼2007-09-23 18:35:15
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xuuue

★
johnsooh(金币+1,VIP+0):thx
我以前用1.4M时，还好，后来改成2M就出现这个问题了，我用乙醇沉淀DNA时，另外加了0.5倍体积5M的氯化钠，出来的碎末状沉淀很多，后来我用乙醇沉淀DNA时不加氯化钠，出来了一点碎末状沉淀，摇摇以后又溶解了，所以我认为这是典型的盐析盐溶现象，是盐离子太多的缘故。
谢谢guohuayin，说得很有道理，我每次吸上清的时候都会将上清留点底。
最近我还碰到的问题是，提了半天，后来检测只有RNA的条带，邪门了。我不是个新手，以前从来没遇到这种情况，现在是百思不得其解，大家帮忙分析分析阿。
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6楼2007-09-23 21:39:01
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yaya1712

铁虫 (小有名气)
最近我还碰到的问题是，提了半天，后来检测只有RNA的条带，邪门了。我不是个新手，以前从来没遇到这种情况，现在是百思不得其解，大家帮忙分析分析阿。

我已经有三批的样也都是这样子了，真的是邪门了
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7楼2007-09-24 20:57:36
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shining-rose

金虫 (小有名气)
★ ★
johnsooh(金币+1,VIP+0):多谢提供切身经验
plantsoil(金币+1,VIP+0):补充奖励
这个我更是有体会呀
俺做了一个暑假的ctab

这就可能是提取材料的问题了
我提得是植物dna，我一开始提得还很顺利的
可后来怎么也提不到dna了，只有rna，和降解的dna
我就找原因呀，派出了试剂，操作，枪头剪切力，干燥等因素
最后我们新采了植物的叶子来对照，发现原来问题出在提取材料上呀
郁闷呀！

还好终于找到原因了，可费了我们不少时间呀
所以以后谁要做提取，记得把材料分几份保存，最好在-80温度下保存
用时在拿出来，不然时间长了dna要降解的！

和大家一起学习交流！
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8楼2007-09-24 22:05:06
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沙砾

★
johnsooh(金币+1,VIP+0):多谢提供切身经验
plantsoil(金币+0,VIP+0):补充奖励
建议大家在做DNA沉淀的时候加入1/10体积的3M的醋酸钠，再加无水乙醇，沉淀效果会更好！
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9楼2007-09-24 22:25:28
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xuuue

其实把叶片用硅胶干燥以后常温保存比较好，我不提倡放到-80度的低温中保存，那样不是太方便，硅胶干燥的叶片常温下可以放几年没有问题。DNA不会降解。

问题是我用新鲜的叶片提出只有RNA的条带，难道是我没有充分研磨，但是一个小时温浴DNA也应该出来了阿。
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10楼2007-09-24 22:45:13
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