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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 5L搅拌罐染菌
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毛桃就是我

银虫 (著名写手)

[求助] 5L搅拌罐染菌

实验室最近上罐老染菌，5L的百仑搅拌罐，装液量3.5L，离位灭菌，121°，30min。
自备小型空压机，压缩空气入罐前过0.2um空气滤膜，培养基乳糖（3%）、酵母浸粉（0.3%）。
空培15h后染菌，可能原因在哪？排除发酵罐漏气，灭菌不彻底，空气滤膜（3支精密滤膜串联），哪位大虫能给点建设性意见！
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木有签名呀！
1楼 2013-04-15 16:27:54
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匿名

用户注销 (知名作家)
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
毛桃就是我: 金币+5, ★有帮助 2013-04-15 16:44:54
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2楼2013-04-15 16:40:04
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毛桃就是我

银虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shangyukuan at 2013-04-15 16:40:04
0~15小时有没有补过料呀，罐子上的那个取样管是不是原装的呀？你检查过没有，我这两个他们10L的罐，两个原装的取样管都是在支管焊接的地方漏，还有呀，3个过滤器你要能确定至少有1个是完好的，

首先感谢大侠帮忙！
没有补过料
取样管是橡胶管 和罐体相连的金属导管处接的橡胶管 用夹子缠绕 用酒精检查过了 没有漏气
过滤器一个全新的 2个半旧的
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木有签名呀！
3楼2013-04-15 16:48:46
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匿名

用户注销 (知名作家)
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4楼2013-04-15 17:05:02
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毛桃就是我

银虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by shangyukuan at 2013-04-15 17:05:02
酒精检查？？头一次听说，您是怎么做的呀？还有您是怎么取样的呀？有可能取样时污染

就是用酒精检漏  好像有人用肥皂水吧
空培过程 没有取样
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木有签名呀！
5楼2013-04-15 17:33:07
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匿名

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6楼2013-04-15 17:41:22
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毛桃就是我

银虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by shangyukuan at 2013-04-15 17:41:22
好吧，那个你检漏时用多大的压力呀？...

说来惭愧呀！发酵罐没有压力表！！
只能空压机输出压力0.2mpa，我一直憋压到最大了！
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木有签名呀！
7楼2013-04-15 18:33:47
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xxxkeke

实习版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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毛桃就是我: 金币+5, ★有帮助, 我再检查检查！ 2013-04-15 21:47:24
我觉得空气过滤器很有可能有问题。lz滤器后端能灭菌的不？离线灭罐时滤膜不灭的吧？
还有罐子上有没有其他探头接口什么的？检查下有无泄漏。  
再然后就是湿热灭菌时没有完全灭活。有没有生物指示剂可以验证下。。。
仅仅是个人观点哈。。。
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8楼2013-04-15 20:58:01
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孙兰超

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的实验室是不是环境太恶劣了啊 ？ 可以用甲醛熏一个晚上吧
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9楼2013-04-15 22:01:35
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tanche163

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
请先镜检，确定杂菌种类。如果染菌为芽孢杆菌，因其耐热可能是灭菌不彻底，如果是霉菌，可能是空气中带过来的，比如通气带入或者漏气。
1. 是否是空气滤膜问题：（1）不通气空培养，夹住进出气管路；（2）滤膜全部更换。如果继续染菌，则可能灭菌不彻底或不密闭。
2. 检查气密性，lz用酒精检查我是第一次看到这样的方法，很山寨。
3. 考虑之前发酵正常时灭菌条件是否和现在一致？分析哪些因素发生改变
我暂时就想到这么多
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阳光总在风雨后
10楼2013-04-15 22:50:22
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