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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求有经验的教我 怎么做真菌石斛小菇的原生质体
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mm3545

新虫 (小有名气)

[交流] 求有经验的教我 怎么做真菌石斛小菇的原生质体

本人现在在做石斛小菇的原生质体，该真菌细胞壁多糖比较多，生长也比较慢，做原生质体的时候，我用了两个方案
1、蜗牛酶、纤维素酶和溶菌酶的混合液；
2、lysing Enzymes(sigma)；
各酶的浓度都是0.25克。温度是30度，消化了很长时间都没多少原生质体。
请高手有经验的教我！！实验过程中需要注意什么，最好有个步骤给我！

这个是我的步骤：
2.1菌体培养：PDA（土豆200g/L、葡萄糖20g/L、琼脂）。
2.2大量菌丝产生：PDB培养
2.3菌丝碎片收集：菌丝磨碎（磨碎机打磨，注意温度不能过高），离心收集。50ml离心管 8000rpm 10min，YEPD清洗一次。
2.4幼植体培养：将菌丝碎片加入YEPD培养基中，25度200rpm 摇菌过夜 （用于产生新鲜的菌丝进行原生质体裂解）。
2.5菌丝收集：灭菌漏斗、擦镜纸过滤，收集新鲜菌丝。并用0.7 M NaCl等渗液洗涤。
2.6将细胞壁降解酶(蜗牛酶、溶菌酶、纤维素酶各0.2g或lysing enzymes 0.2g)用20 ml 0.7 M NaCl等渗液溶解，细菌滤器过滤。加入菌丝。30度100rpm 酶解2-3h。显微镜查看
2.7擦镜纸过滤至50ml离心管，收集过滤液（含原生质体）
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1楼 2013-04-15 10:42:23
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sunny_andy

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你好 你的原生质体做出来了没
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2楼2013-06-14 19:48:38
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beauty佳丽

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你好，请问你后面是怎么解决这个问题的

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3楼2018-11-12 09:51:11
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