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缤纷惠儿

新虫 (初入文坛)

[求助] 做Western如何一张膜同时做3个单抗,我知道剪膜,但总是剪不好,如何精确剪膜???

做Western想同时做几个单抗,我们的方法是剪开FVDF膜,分别孵育不同的一抗,但是,即使有marker作为参考,还是剪不好,有时做不出来就经常怀疑是剪膜把蛋白减到别的部分上去了,求助各位大侠,你们是如何做的???
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吃亏是福,好人有好报
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缤纷惠儿

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by hellolin at 2013-04-10 23:57:26
用丽春红染一下膜,看着条带见就是了。完了之后在用tbst把丽春红洗掉就可以了

恩恩,不知道丽春红贵不贵,担心老师不给买。貌似这样也是粗略的定位,那么多条带,比如60到80间的marker,如果相同时做64和73蛋白的单抗,怎样区分开,还是说没有更好的办法,只能做其中的一个蛋白抗体。
吃亏是福,好人有好报
7楼2013-04-11 11:30:28
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ssy7166

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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myprayer: 2013-04-11 08:13:09
方法1:如果你的蛋白很多,多跑几板胶,整张膜只上一个抗体,而且坚持用同一产品Marker同一浓度的分离胶,多做几次就能确定目的蛋白相对与marker的位置。

方法2:如果蛋白样不多时,整张膜先上一个最重要的抗体;发光后用strip buffer洗,然后再上第二种抗体,再洗;最后还可以再上一下内参。

多做WB慢慢就会有感觉了。
2楼2013-04-10 23:10:08
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hellolin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用丽春红染一下膜,看着条带见就是了。完了之后在用tbst把丽春红洗掉就可以了
scienceguy
3楼2013-04-10 23:57:26
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用预染的marker分开要剪开的样品泳道,剪marker中间就可以了。
4楼2013-04-11 02:17:20
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