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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 线粒体基质中有一种酶，请设计分离纯化该酶的实验方案?
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signal128

银虫 (小有名气)

[求助] 线粒体基质中有一种酶，请设计分离纯化该酶的实验方案?

请问下，
“线粒体基质中有一种酶，请设计分离纯化该酶的实验方案？”，
如何进行解答？？？

知道的，能否给出正确的答案，谢谢！
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1楼 2013-04-10 20:10:41
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢分享经验 2013-04-11 08:04:32
signal128: 金币+6, ★★★很有帮助, 您好!非常感谢你的回复,请问下,如果这个做为一个\\\"考试题目\\\",如何进行详细回答呢?别外,你说的\\\"重组表达\\\",是如何进行的呢? 2013-04-11 11:19:55
silicare: BioEPI+1 2013-04-27 17:03:58
1. 先纯化完整的线粒体（细胞质基质以及细胞膜以及其他细胞器含有的蛋白都比较多，降低这些蛋白对目标蛋白的影响，减少杂蛋白）
2. 线粒体破膜，释放出基质蛋白酶。（千万不能用含有表面活性剂的东西）
3. 超速离心，除去线粒体膜碎片，酶存在于上清溶液中。（线粒体内的酶大部分都位于内膜上，除去膜碎片可以除去大部分杂蛋白）
4. 含有酶的上清液根据酶的性质，过各种柱子。进一步纯化。
提醒：这样得到的蛋白量多少不好说，但工作量大。已经确定是线粒体基质内的酶，为何不考虑下重组表达。从表达量与纯化方式来看，重组表达占优势。
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2楼2013-04-10 22:37:51
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signal128

银虫 (小有名气)
如果做为一个考试题，期待是否有更完美的答案？
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3楼2013-04-11 11:20:49
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
signal128: 金币+8, ★★★很有帮助, 哦，f那么“以胰岛素为例说明蛋白质从翻译到具有活性所经历的生化事件（过程）？”，这个作为考试题，如何解答呢？ 2013-04-12 18:29:02
引用回帖:
2楼: Originally posted by ynkuaile at 2013-04-10 22:37:51
1. 先纯化完整的线粒体（细胞质基质以及细胞膜以及其他细胞器含有的蛋白都比较多，降低这些蛋白对目标蛋白的影响，减少杂蛋白）
2. 线粒体破膜，释放出基质蛋白酶。（千万不能用含有表面活性剂的东西）
3. 超速离 ...

我觉得你把我说的话再润色一下比较好，我只是说个大概。考题的话，这个是个综合题，看你对蛋白的分离纯化了解多少。到第四部还只是粗酶液，有待你将蛋白沉淀过各种柱子。我说重组表达，是因为你说：线粒体基质中有一种酶，你都知道这个酶的定位了，至少知道他的名字与其他一些性质，克隆基因，用模式生物重组表达，这个方法比你提取，我觉得简单很多。线粒体基质中的酶，多为氧化还原酶类，参考一些代谢过程中的酶的提取过程，能量代谢中的酶有很多在线粒体基质，参考一下这类的文献吧。
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4楼2013-04-12 13:36:22
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
signal128: 金币+6, ★★★很有帮助, 谢谢～～ 2013-04-13 16:20:53
引用回帖:
2楼: Originally posted by ynkuaile at 2013-04-10 22:37:51
1. 先纯化完整的线粒体（细胞质基质以及细胞膜以及其他细胞器含有的蛋白都比较多，降低这些蛋白对目标蛋白的影响，减少杂蛋白）
2. 线粒体破膜，释放出基质蛋白酶。（千万不能用含有表面活性剂的东西）
3. 超速离 ...

这个我不太清楚，只知道应该是由胰岛β细胞基因表达出前胰岛素原，然后N端疏水断被酶切掉成为胰岛素原，胰岛素原再被肽酶激活，切去C肽，就成了胰岛素。你查查资料，具体我不太清楚。
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5楼2013-04-12 21:30:16
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