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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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wizardfan: 金币+3, 谢谢分享经验 2013-04-11 08:04:32
signal128: 金币+6, ★★★很有帮助, 您好!非常感谢你的回复,请问下,如果这个做为一个\\\"考试题目\\\",如何进行详细回答呢?别外,你说的\\\"重组表达\\\",是如何进行的呢? 2013-04-11 11:19:55
silicare: BioEPI+1 2013-04-27 17:03:58
1. 先纯化完整的线粒体(细胞质基质以及细胞膜以及其他细胞器含有的蛋白都比较多,降低这些蛋白对目标蛋白的影响,减少杂蛋白)
2. 线粒体破膜,释放出基质蛋白酶。(千万不能用含有表面活性剂的东西)
3. 超速离心,除去线粒体膜碎片,酶存在于上清溶液中。(线粒体内的酶大部分都位于内膜上,除去膜碎片可以除去大部分杂蛋白)
4. 含有酶的上清液根据酶的性质,过各种柱子。进一步纯化。
提醒:这样得到的蛋白量多少不好说,但工作量大。已经确定是线粒体基质内的酶,为何不考虑下重组表达。从表达量与纯化方式来看,重组表达占优势。
2楼2013-04-10 22:37:51
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