24小时热门版块排行榜    

查看: 1469  |  回复: 7

lamborghini_

铜虫 (正式写手)

[交流] 懂细胞的高手们请来看看我的原代肝细胞吧。。。 有些问题想请教 已有3人参与

最近都在提大鼠原代肝细胞,用的是两步灌流法,提一次很费劲,但是细胞养两天就死掉了,无法进行实验。昨天又提了一次,我拍了几张照片,想请大神们看看我的细胞活性,因为我不知道如何判断细胞状态好坏。
      种的是24孔板,之前铺过鼠尾胶原,过夜放置,拍的照片是种板后24小时。用pbs冲洗的时候会明显看到有东西被吹起来。
      还有个问题,最后一张图片中用红圈标示出来的,很小的那种类似于气泡的东西是什么?以前用培养瓶是看不到这种东西的..
谢谢各位大神了~

01.jpg



03.jpg



02`.jpg
回复此楼
以勤奋为信仰者必成大器
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

芥末香

木虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
karl2100: 金币+1, 谢谢回复! 2013-05-03 23:28:22
我也是做原代肝细胞,青春都耗在这上面了。你说的那个像小气泡一样的东西可能是肝脏里面的其他非实质细胞,你最好用密度梯度离心来制备细胞。而且你的细胞状态貌似很差,都看不到有细胞连接。劝你换个课题吧
吃得苦中苦,也不一定能开上路虎.
2楼2013-04-28 13:49:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lamborghini_

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 芥末香 at 2013-04-28 13:49:37
我也是做原代肝细胞,青春都耗在这上面了。你说的那个像小气泡一样的东西可能是肝脏里面的其他非实质细胞,你最好用密度梯度离心来制备细胞。而且你的细胞状态貌似很差,都看不到有细胞连接。劝你换个课题吧

图片上的细胞状态确实很差,估计都死了。最近一次提的细胞状态还可以,可以看到贴壁。我觉得操作到位了还是可以提到一定活性的细胞的。
只是肝实质细胞是不会增殖的,这一点很悲剧。
我最近觉得那种小泡可能是细胞破碎后的碎片,因为透过显微镜可以看到活细胞里面也会有这种类似的小泡。   也不知道我的猜测对不对....
以勤奋为信仰者必成大器
3楼2013-04-28 14:36:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

芥末香

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by lamborghini_ at 2013-04-28 14:36:28
图片上的细胞状态确实很差,估计都死了。最近一次提的细胞状态还可以,可以看到贴壁。我觉得操作到位了还是可以提到一定活性的细胞的。
只是肝实质细胞是不会增殖的,这一点很悲剧。
我最近觉得那种小泡可能是细 ...

我看文献上立体培养20多天后是可以增殖的,做CYP诱导一定要立体培养,单层培养的话很难有好的结果
吃得苦中苦,也不一定能开上路虎.
4楼2013-05-01 21:20:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lamborghini_

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 芥末香 at 2013-05-01 21:20:16
我看文献上立体培养20多天后是可以增殖的,做CYP诱导一定要立体培养,单层培养的话很难有好的结果...

恩,谢谢你的建议~~请问你以前做过这方面的实验吗,?  还有,立体培养你在最上面一层是铺什么胶?
以勤奋为信仰者必成大器
5楼2013-05-01 22:58:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

芥末香

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1型的鼠尾胶原蛋白,但是效果不好
吃得苦中苦,也不一定能开上路虎.
6楼2013-05-03 15:54:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鱼化石

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
那些小的泡泡,是不是衣原体?
7楼2013-06-15 20:14:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

0640409

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
分离肝细胞时有问题,基本没看到活的原代肝细胞,跟细胞纯不纯没有关系,原代肝细胞铺板4小时后立马就要换液,贴了就活了,没贴就是死的,时间越长越没用
细胞分离后状态不好,就会有很多小泡泡,可能是细胞破了后的,也有可能是细胞密度大,死细胞也贴壁,建议多练练手,把手术操作提高下
8楼2013-09-22 15:40:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lamborghini_ 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +15 爱看书的可乐 2026-08-26 17/850 2026-08-27 11:29 by xxniao123
[基金申请] 面上合作单位盖章 +3 ssyjh 2026-08-27 3/150 2026-08-27 09:59 by 阿拉贡aragon
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +4 a089 2026-08-26 5/250 2026-08-27 09:24 by Howard28
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 04:33 by Ie9AyIAvGbvs
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
信息提示
请填处理意见