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lamborghini_

铜虫 (正式写手)

[交流] 懂细胞的高手们请来看看我的原代肝细胞吧。。。 有些问题想请教 已有3人参与

最近都在提大鼠原代肝细胞,用的是两步灌流法,提一次很费劲,但是细胞养两天就死掉了,无法进行实验。昨天又提了一次,我拍了几张照片,想请大神们看看我的细胞活性,因为我不知道如何判断细胞状态好坏。
      种的是24孔板,之前铺过鼠尾胶原,过夜放置,拍的照片是种板后24小时。用pbs冲洗的时候会明显看到有东西被吹起来。
      还有个问题,最后一张图片中用红圈标示出来的,很小的那种类似于气泡的东西是什么?以前用培养瓶是看不到这种东西的..
谢谢各位大神了~

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以勤奋为信仰者必成大器
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芥末香

木虫 (小有名气)

★ ★
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karl2100: 金币+1, 谢谢回复! 2013-05-03 23:28:22
我也是做原代肝细胞,青春都耗在这上面了。你说的那个像小气泡一样的东西可能是肝脏里面的其他非实质细胞,你最好用密度梯度离心来制备细胞。而且你的细胞状态貌似很差,都看不到有细胞连接。劝你换个课题吧
吃得苦中苦,也不一定能开上路虎.
2楼2013-04-28 13:49:37
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lamborghini_

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 芥末香 at 2013-04-28 13:49:37
我也是做原代肝细胞,青春都耗在这上面了。你说的那个像小气泡一样的东西可能是肝脏里面的其他非实质细胞,你最好用密度梯度离心来制备细胞。而且你的细胞状态貌似很差,都看不到有细胞连接。劝你换个课题吧

图片上的细胞状态确实很差,估计都死了。最近一次提的细胞状态还可以,可以看到贴壁。我觉得操作到位了还是可以提到一定活性的细胞的。
只是肝实质细胞是不会增殖的,这一点很悲剧。
我最近觉得那种小泡可能是细胞破碎后的碎片,因为透过显微镜可以看到活细胞里面也会有这种类似的小泡。   也不知道我的猜测对不对....
以勤奋为信仰者必成大器
3楼2013-04-28 14:36:28
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芥末香

木虫 (小有名气)


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引用回帖:
3楼: Originally posted by lamborghini_ at 2013-04-28 14:36:28
图片上的细胞状态确实很差,估计都死了。最近一次提的细胞状态还可以,可以看到贴壁。我觉得操作到位了还是可以提到一定活性的细胞的。
只是肝实质细胞是不会增殖的,这一点很悲剧。
我最近觉得那种小泡可能是细 ...

我看文献上立体培养20多天后是可以增殖的,做CYP诱导一定要立体培养,单层培养的话很难有好的结果
吃得苦中苦,也不一定能开上路虎.
4楼2013-05-01 21:20:16
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lamborghini_

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 芥末香 at 2013-05-01 21:20:16
我看文献上立体培养20多天后是可以增殖的,做CYP诱导一定要立体培养,单层培养的话很难有好的结果...

恩,谢谢你的建议~~请问你以前做过这方面的实验吗,?  还有,立体培养你在最上面一层是铺什么胶?
以勤奋为信仰者必成大器
5楼2013-05-01 22:58:26
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芥末香

木虫 (小有名气)


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1型的鼠尾胶原蛋白,但是效果不好
吃得苦中苦,也不一定能开上路虎.
6楼2013-05-03 15:54:40
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鱼化石

新虫 (初入文坛)


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那些小的泡泡,是不是衣原体?
7楼2013-06-15 20:14:07
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0640409

银虫 (小有名气)


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分离肝细胞时有问题,基本没看到活的原代肝细胞,跟细胞纯不纯没有关系,原代肝细胞铺板4小时后立马就要换液,贴了就活了,没贴就是死的,时间越长越没用
细胞分离后状态不好,就会有很多小泡泡,可能是细胞破了后的,也有可能是细胞密度大,死细胞也贴壁,建议多练练手,把手术操作提高下
8楼2013-09-22 15:40:02
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