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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 懂细胞的高手们请来看看我的原代肝细胞吧。。。 有些问题想请教
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lamborghini_

铜虫 (正式写手)

[交流] 懂细胞的高手们请来看看我的原代肝细胞吧。。。 有些问题想请教 已有3人参与

最近都在提大鼠原代肝细胞，用的是两步灌流法，提一次很费劲，但是细胞养两天就死掉了，无法进行实验。昨天又提了一次，我拍了几张照片，想请大神们看看我的细胞活性，因为我不知道如何判断细胞状态好坏。
      种的是24孔板，之前铺过鼠尾胶原，过夜放置，拍的照片是种板后24小时。用pbs冲洗的时候会明显看到有东西被吹起来。
      还有个问题，最后一张图片中用红圈标示出来的，很小的那种类似于气泡的东西是什么？以前用培养瓶是看不到这种东西的..
谢谢各位大神了~

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以勤奋为信仰者必成大器
1楼 2013-04-10 13:50:34
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芥末香

木虫 (小有名气)
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karl2100: 金币+1, 谢谢回复！ 2013-05-03 23:28:22
我也是做原代肝细胞，青春都耗在这上面了。你说的那个像小气泡一样的东西可能是肝脏里面的其他非实质细胞，你最好用密度梯度离心来制备细胞。而且你的细胞状态貌似很差，都看不到有细胞连接。劝你换个课题吧
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吃得苦中苦，也不一定能开上路虎.
2楼2013-04-28 13:49:37
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lamborghini_

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 芥末香 at 2013-04-28 13:49:37
我也是做原代肝细胞，青春都耗在这上面了。你说的那个像小气泡一样的东西可能是肝脏里面的其他非实质细胞，你最好用密度梯度离心来制备细胞。而且你的细胞状态貌似很差，都看不到有细胞连接。劝你换个课题吧

图片上的细胞状态确实很差，估计都死了。最近一次提的细胞状态还可以，可以看到贴壁。我觉得操作到位了还是可以提到一定活性的细胞的。
只是肝实质细胞是不会增殖的，这一点很悲剧。
我最近觉得那种小泡可能是细胞破碎后的碎片，因为透过显微镜可以看到活细胞里面也会有这种类似的小泡。   也不知道我的猜测对不对....
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以勤奋为信仰者必成大器
3楼2013-04-28 14:36:28
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芥末香

木虫 (小有名气)
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引用回帖:
3楼: Originally posted by lamborghini_ at 2013-04-28 14:36:28
图片上的细胞状态确实很差，估计都死了。最近一次提的细胞状态还可以，可以看到贴壁。我觉得操作到位了还是可以提到一定活性的细胞的。
只是肝实质细胞是不会增殖的，这一点很悲剧。
我最近觉得那种小泡可能是细 ...

我看文献上立体培养20多天后是可以增殖的，做CYP诱导一定要立体培养，单层培养的话很难有好的结果
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4楼2013-05-01 21:20:16
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lamborghini_

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 芥末香 at 2013-05-01 21:20:16
我看文献上立体培养20多天后是可以增殖的，做CYP诱导一定要立体培养，单层培养的话很难有好的结果...

恩，谢谢你的建议~~请问你以前做过这方面的实验吗，？  还有，立体培养你在最上面一层是铺什么胶？
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以勤奋为信仰者必成大器
5楼2013-05-01 22:58:26
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芥末香

木虫 (小有名气)
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1型的鼠尾胶原蛋白，但是效果不好
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吃得苦中苦，也不一定能开上路虎.
6楼2013-05-03 15:54:40
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鱼化石

新虫 (初入文坛)
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那些小的泡泡，是不是衣原体？
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7楼2013-06-15 20:14:07
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0640409

银虫 (小有名气)
★
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分离肝细胞时有问题，基本没看到活的原代肝细胞，跟细胞纯不纯没有关系，原代肝细胞铺板4小时后立马就要换液，贴了就活了，没贴就是死的，时间越长越没用
细胞分离后状态不好，就会有很多小泡泡，可能是细胞破了后的，也有可能是细胞密度大，死细胞也贴壁，建议多练练手，把手术操作提高下
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8楼2013-09-22 15:40:02
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