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diandianyuyu金虫 (小有名气)
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急！待毕业！使用ELISA检测血清中抗体滴度，包被时的抗原可以不与载体蛋白偶联吗？
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题目有点长，我把问题再仔细说一下： 本实验室自己合成了一种蛋白G的并列体二聚物，然后用OVA和这种并列体二聚物偶联形成抗原免疫大鼠。我想使用ELISA的方法检测血清中G蛋白的抗体滴度。 问题是：包被时，包被抗原有什么要求？是必须和免疫抗原一样吗？G蛋白的单体可以当做包被抗原吗？G蛋白包被时对偶联的大分子载体有什么要求？ 谢谢大家！ |
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2楼2013-04-08 20:21:56
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| 一般而言，相互作用的两个蛋白质各有6个氨基酸残基参与相互作用就已经能够发生蛋白质-蛋白质之间的专一性地相互识别。目前一种在蛋白质组学中的去除高风度蛋白质，暴露低丰度蛋白质样品的样品准备方法，就是以此为基础的，叫做equaliser beads,即在高分子微球体表面构建出6个氨基酸残基构成的专一性的蛋白质受体（线性六肽），6个氨基酸残基每个位点都从20种氨基酸中选择其一，这样构成6的20次方种大约有64 million种专一性的蛋白质受体（线性六肽）构成的一个巨型蛋白质的专一性受体库，如此无论什么样的低丰度蛋白质和高分度蛋白质都会结合到equaliser beads，而且equaliser beads上的专一性的蛋白质受体（线性六肽）是随机分布的，这样，各种丰度的蛋白质结合到equaliser beads的摩尔数量大致不会相差10倍以上，然后用离心方法把equaliser beads从粗提的样品液中分离出来，再加大离子强度，洗下equaliser beads的摩尔数量大致不会相差10倍以上的各种蛋白质，这样低丰度蛋白质就暴露出了。有数据表明：蛋白质-蛋白质相互作用的内表面积多在2000-5000平方埃，一般不小于400平方埃，包括抗体-抗原相互作用。各有6个以上氨基酸相互作用的抗体与抗原发生免疫识别应该不是不是问题。 |
9楼2013-04-15 23:49:41
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上文的参考文献：C.Kleanthous edits,Protein-Protein Recognition,Oxford University Press,2000,P10-13. M.R.Wikins etal.,Proteome Research,Springer,2007,P30-36. 另外，半抗原与BSA等连接蛋白共价连接之后，可能半抗原的原有的免疫反应性会发生改变。参见： 1.Robert M. MacCallum, Andrew C. R. Martin , Janet M. Thornton. Antibody-antigenInteractions: Contact Analysis and Binding Site Topography.J. Mol. Biol. 1996,262:732–745 ， 2.Helena Persson, Johan Lantto,Mats Ohlin. A Focused Antibody Library for Improved Hapten Recognition.J. Mol. Biol. 2006,357, 607–620 ， 3.Lucy C. Harris , Paul J. Davis , David C. James. Fatty acids as haptens: exploring the limits of antigenicity. Molecular Immunology, 2003 ,40: 381–389 。 |
10楼2013-04-16 00:01:39
