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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » Griess试剂测巨噬细胞NO含量
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yunpei-89

新虫 (初入文坛)

[求助] Griess试剂测巨噬细胞NO含量

我最近在做Griess试剂测细胞炎症反应产生的NO含量，用的6孔板，一般吸光度值做到0.2-0.4之间。做标曲的话用100uL 100umol/L的NaNO2与等体积Griess试剂反应也只做到0.9的吸光度值，所以细胞反应中的响应值变动范围相对就比较低。后来换用了碧云天的试剂盒，原理也是Griess试剂反应，按它上面的最大量50uL 100umol/L的NaNO2与100uLGriess试剂反应，（终浓度33.3umol/L）,吸光度值做到0.5多，我想继续往下面做，但老师说这样做误差太大，让我找原因，但试了很久都差别不大。想问下大家做的反应响应值大致都是多少的，如果都是这样我就不在这上面耗时间了。拜谢。
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1楼 2013-04-08 16:36:06
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bosir

木虫 (小有名气)

嘻嘻

【答案】应助回帖

我们用哪个promega做的话，吸光度相对都比较低，要做四个平行，效果还行，碧云天的货常出问题啊
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嘻嘻
2楼2013-04-12 21:38:54
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yunpei-89

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bosir at 2013-04-12 21:38:54
我们用哪个promega做的话，吸光度相对都比较低，要做四个平行，效果还行，碧云天的货常出问题啊

谢谢您的关注，不好意思，我不太明白您说的promega是什么？另外，前辈的专业是做细胞的，想请教一下，在这个实验中哪些因素可能有干扰。比如培养基含不含酚红，还有培养基中有的含丙酮酸钠等。我觉得我的平行做的不是很好，现在在做不同浓度脂多糖致炎，做的不同平行，NO变化趋势就不太一样。期待您的回复。
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3楼2013-05-12 21:45:03
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bosir

木虫 (小有名气)

嘻嘻

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
yunpei-89: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-05-19 23:06:11
引用回帖:
3楼: Originally posted by yunpei-89 at 2013-05-12 21:45:03
谢谢您的关注，不好意思，我不太明白您说的promega是什么？另外，前辈的专业是做细胞的，想请教一下，在这个实验中哪些因素可能有干扰。比如培养基含不含酚红，还有培养基中有的含丙酮酸钠等。我觉得我的平行做的不 ...

promega是一氧化氮试剂盒的牌子，进口的，效果还比较好。我们做骨髓来源巨噬细胞，用LPS刺激的阳性对照上升时比较明显的，而且你说的培养基，没什么影响的啦。
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嘻嘻
4楼2013-05-14 13:33:32
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yunpei-89

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by bosir at 2013-05-14 13:33:32
promega是一氧化氮试剂盒的牌子，进口的，效果还比较好。我们做骨髓来源巨噬细胞，用LPS刺激的阳性对照上升时比较明显的，而且你说的培养基，没什么影响的啦。...

前辈，我的步骤是这样的，细胞密度是3*10^5，24h后换无血清培养基（担心胎牛血清对药物有影响），适应性培养12h后，换成加药的培养基（无胎牛血清），然后养24h，在535nm测吸光度值，平时大多响应值是在0.3左右。最近经常出现空白培养基和细胞组的响应值高于脂多糖组及其他实验组。不知道前辈有没有遇到这类困扰？希望能够指点下小妹。
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5楼2013-05-19 23:12:57
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bosir

木虫 (小有名气)

嘻嘻
你是 普通培养基没有用血清 还是用的培养可以用的无血清培养基，如果是普通培养基 不加血清，可能细胞已经处于应激状态了，NO可能已经有变化了，你可以直接试试有血清的，或者说血清对你实验其他问题影响比较大，可以试试买个无血清培养基来用
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yunpei-89
嘻嘻
6楼2013-05-22 11:56:33
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风中的羽翼_

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by bosir at 2013-05-22 11:56:33
你是 普通培养基没有用血清 还是用的培养可以用的无血清培养基，如果是普通培养基 不加血清，可能细胞已经处于应激状态了，NO可能已经有变化了，你可以直接试试有血清的，或者说血清对你实验其他问题影响比较大，可 ...

你好，希望请教您一个问题。
用LPS诱导RAW264.7细胞产生炎症反应，应该选择哪种LPS？我现在一头雾水，很想得到您的帮助
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7楼2013-05-22 12:47:31
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yunpei-89

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by bosir at 2013-05-22 11:56:33
你是 普通培养基没有用血清 还是用的培养可以用的无血清培养基，如果是普通培养基 不加血清，可能细胞已经处于应激状态了，NO可能已经有变化了，你可以直接试试有血清的，或者说血清对你实验其他问题影响比较大，可 ...

好的，真的受益很多。我不知道还有培养用的无血清培养基，我就直接用的加双抗的基础培养基来做了。真心谢谢您。
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8楼2013-05-27 17:09:06
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yunpei-89

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 风中的羽翼_ at 2013-05-22 12:47:31
你好，希望请教您一个问题。
用LPS诱导RAW264.7细胞产生炎症反应，应该选择哪种LPS？我现在一头雾水，很想得到您的帮助...

我用的是sigma标品，大肠杆菌来源的，要买原装的。不过貌似来源影响不大。
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9楼2013-05-27 17:40:21
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