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emosgaogao

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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10楼: Originally posted by xjtu0025 at 2013-04-07 21:53:48
没有跑变性电泳,所有有一点降解,并且胶是之前配好的。

新总RNA.jpg
...

那楼主换下琼脂糖和电泳buffer,再电泳下试试看,同时最好能点上以前已经能跑出条带的阳性对照。我还是觉得楼主的样品出问题的可能性比较大。
忍得住诱惑,耐得住寂寞
11楼2013-04-07 22:55:00
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xjtu0025

新虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by emosgaogao at 2013-04-07 22:55:00
那楼主换下琼脂糖和电泳buffer,再电泳下试试看,同时最好能点上以前已经能跑出条带的阳性对照。我还是觉得楼主的样品出问题的可能性比较大。...

唉,关键就是没有呀.....实验室就我一个人做rna,也是刚刚才开始做rna....谢谢了,anyway.
我会去测一下纯度和浓度...
12楼2013-04-08 11:55:33
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emosgaogao

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by xjtu0025 at 2013-04-08 11:55:33
唉,关键就是没有呀.....实验室就我一个人做rna,也是刚刚才开始做rna....谢谢了,anyway.
我会去测一下纯度和浓度......

问隔壁实验室要点样品,楼主从零开始,要有十足的干劲啊,
忍得住诱惑,耐得住寂寞
13楼2013-04-08 16:44:40
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xjtu0025

新虫 (小有名气)

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13楼: Originally posted by emosgaogao at 2013-04-08 16:44:40
问隔壁实验室要点样品,楼主从零开始,要有十足的干劲啊,...

很难借到呀,我只是个小本科生.老师也不咋管我.我测了纯度,好想盐类的残留重,可能这样抑制了我的MMLV.我可不可以对剩下的样品异丙醇-离心-乙醇多次洗涤来处理纯化呢?
14楼2013-04-08 21:35:54
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XOooZzz

银虫 (小有名气)

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8楼: Originally posted by xjtu0025 at 2013-04-07 21:46:33
对呀。。就是做完PCR之后拿出来,上面是浅色近乎于无色的,下面是深蓝色的。说明书说直接上洋,我就用吸头吹匀以后上,然后marker的溴酚蓝会往前跑,样品的不会。。。
用过南京凯基的一步氏RTPCR么...

感觉是试剂有问题.正常情况下溴酚蓝不应沉淀。
lz做个空白对照,就是把RNA换成水,做一次RT-PCR。如果溴酚蓝还是沉淀,保留该反应物,然后找卖你们试剂的人索赔。
但如果空白对照正常,就是你的RNA含有杂质了。
15楼2013-04-08 22:22:10
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xjtu0025

新虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by XOooZzz at 2013-04-08 22:22:10
感觉是试剂有问题.正常情况下溴酚蓝不应沉淀。
lz做个空白对照,就是把RNA换成水,做一次RT-PCR。如果溴酚蓝还是沉淀,保留该反应物,然后找卖你们试剂的人索赔。
但如果空白对照正常,就是你的RNA含有杂质了。...

诶,我做过好多次阴性对照呀,都是沉淀的..
真的假的呀,那好,明天我做一下,然后拍照索赔去....我还天真的以为溴酚蓝沉淀是正常的呢...抑郁啊...国产真的是不行...
16楼2013-04-08 22:38:00
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XOooZzz

银虫 (小有名气)

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16楼: Originally posted by xjtu0025 at 2013-04-08 22:38:00
诶,我做过好多次阴性对照呀,都是沉淀的..
真的假的呀,那好,明天我做一下,然后拍照索赔去....我还天真的以为溴酚蓝沉淀是正常的呢...抑郁啊...国产真的是不行......

呃,索赔是一方面,另外赶紧找个正常的试剂把自己的实验做了吧。
有这样严重的问题怎么不问问身边的师兄师姐呢?
17楼2013-04-09 15:05:42
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xjtu0025

新虫 (小有名气)

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17楼: Originally posted by XOooZzz at 2013-04-09 15:05:42
呃,索赔是一方面,另外赶紧找个正常的试剂把自己的实验做了吧。
有这样严重的问题怎么不问问身边的师兄师姐呢?...

没有师兄师姐,我今天打电话了,客服说沉淀是正常的。不过答应换一个新的给我。然后我又试了一次,做了一组65度温浴RNA和引物再加东西,一组按照说明书加,另一组阴性对照。。。。没有任何东西。。。。

用过天根的产品么,我今天买了一个50bp的marker跑的一坨屎啊,模模糊糊的,其他的marker就好好的。其他的也有50bp的,都可以。
18楼2013-04-09 21:13:50
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XOooZzz

银虫 (小有名气)

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18楼: Originally posted by xjtu0025 at 2013-04-09 21:13:50
没有师兄师姐,我今天打电话了,客服说沉淀是正常的。不过答应换一个新的给我。然后我又试了一次,做了一组65度温浴RNA和引物再加东西,一组按照说明书加,另一组阴性对照。。。。没有任何东西。。。。

用过天根 ...

沉淀绝对是不正常的。
换试剂吧,takara或者promega什么都好。时间是很宝贵的呀,不要浪费在给他们测试产品上。

那个marker就叫50bp marker吗?这个要用高浓度的胶跑。你看看说明书,大约是3%以上?
低浓度的胶跑小片段会跑成一坨屎
高浓度的胶跑大片段也会跑成一坨屎
19楼2013-04-09 22:47:42
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xjtu0025

新虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by XOooZzz at 2013-04-09 22:47:42
沉淀绝对是不正常的。
换试剂吧,takara或者promega什么都好。时间是很宝贵的呀,不要浪费在给他们测试产品上。

那个marker就叫50bp marker吗?这个要用高浓度的胶跑。你看看说明书,大约是3%以上?
低浓度的 ...

说明书写得2.5%的,我3%的还是一坨屎...请教一下,难道小片段一定要用TBE跑?
20楼2013-04-10 09:44:33
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