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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western显影十个浓度只显出来前四个！有图有真相！求助啊！
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babyface121

铁虫 (小有名气)

[求助] western显影十个浓度只显出来前四个！有图有真相！求助啊！

跑western时共有九个浓度，但是只有前四个样显影显出来了，后面的都没有显出来，显出来的条带也很不均匀，下面的是另外一个样，只显出了后面四个浓度，显出来的，有的两边粗中间细得几乎看不见了，是什么原因呢

IMAG0486.jpg
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1楼 2013-04-01 19:40:49
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babyface121

铁虫 (小有名气)
自已顶啊顶！
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2楼2013-04-01 20:33:30
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的上样量是多少？你的内参出来没有？
从你的图来看的话，可能是发光液浇的不均一或一抗二抗孵育摇动不均等啦 原因诸多。。。。
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生物化学与分子生物学
3楼2013-04-02 08:40:03
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ourlab

捐助贵宾 (正式写手)

生命科学博士

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
babyface121(gyesang代发): 金币+2, 鼓励发贴交流，为楼主问题解决提供可能的线索！ 2013-04-27 21:08:09
将膜做立春红染色，检测蛋白分布是否均匀。
如果均匀，则可能是显影问题。显影问题举例: ECL在膜上存留太多，液体过多部分的HRP被过快地在几分钟内灭活。
如果不均匀，则可能是转印问题。例如使用半干转印，平面电极和三明治接触不好，造成局部转印效率低。
上传立春红染色后，可再帮你分析。
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4楼2013-04-03 10:33:42
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babyface121

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lidonghong at 2013-04-02 08:40:03
你的上样量是多少？你的内参出来没有？
从你的图来看的话，可能是发光液浇的不均一或一抗二抗孵育摇动不均等啦 原因诸多。。。。

上样量30ug，这就是内参，我都是在皿里敷的一抗二抗AB液，不知道怎么回事，内参都跑不出来
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5楼2013-04-05 21:17:08
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babyface121

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ourlab at 2013-04-03 10:33:42
将膜做立春红染色，检测蛋白分布是否均匀。
如果均匀，则可能是显影问题。显影问题举例: ECL在膜上存留太多，液体过多部分的HRP被过快地在几分钟内灭活。
如果不均匀，则可能是转印问题。例如使用半干转印，平面电 ...

好的，谢谢，我只考染后转膜后的胶，不太均匀~
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6楼2013-04-05 21:18:11
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zuifengyang

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

转膜的问题，低电流转的时间长点可能能解决问题。
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7楼2013-04-06 07:59:55
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by babyface121 at 2013-04-05 21:17:08
上样量30ug，这就是内参，我都是在皿里敷的一抗二抗AB液，不知道怎么回事，内参都跑不出来...

可能是实验方法的问题，好好在仔细做一次。。。按照实验室惯有的方法做。。。
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生物化学与分子生物学
8楼2013-04-07 09:51:46
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