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babyface121

铁虫 (小有名气)

[求助] western显影十个浓度只显出来前四个!有图有真相!求助啊!

跑western时共有九个浓度,但是只有前四个样显影显出来了,后面的都没有显出来,显出来的条带也很不均匀,下面的是另外一个样,只显出了后面四个浓度,显出来的,有的两边粗中间细得几乎看不见了,是什么原因呢

IMAG0486.jpg
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的上样量是多少?你的内参出来没有?
从你的图来看的话,可能是发光液浇的不均一或一抗二抗孵育摇动不均等啦 原因诸多。。。。
生物化学与分子生物学
3楼2013-04-02 08:40:03
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ourlab

捐助贵宾 (正式写手)

生命科学博士

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
babyface121(gyesang代发): 金币+2, 鼓励发贴交流,为楼主问题解决提供可能的线索! 2013-04-27 21:08:09
将膜做立春红染色,检测蛋白分布是否均匀。
如果均匀,则可能是显影问题。显影问题举例: ECL在膜上存留太多,液体过多部分的HRP被过快地在几分钟内灭活。
如果不均匀,则可能是转印问题。例如使用半干转印,平面电极和三明治接触不好,造成局部转印效率低。
上传立春红染色后,可再帮你分析。
4楼2013-04-03 10:33:42
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babyface121

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lidonghong at 2013-04-02 08:40:03
你的上样量是多少?你的内参出来没有?
从你的图来看的话,可能是发光液浇的不均一或一抗二抗孵育摇动不均等啦 原因诸多。。。。

上样量30ug,这就是内参,我都是在皿里敷的一抗二抗AB液,不知道怎么回事,内参都跑不出来
5楼2013-04-05 21:17:08
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babyface121

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ourlab at 2013-04-03 10:33:42
将膜做立春红染色,检测蛋白分布是否均匀。
如果均匀,则可能是显影问题。显影问题举例: ECL在膜上存留太多,液体过多部分的HRP被过快地在几分钟内灭活。
如果不均匀,则可能是转印问题。例如使用半干转印,平面电 ...

好的,谢谢,我只考染后转膜后的胶,不太均匀~
6楼2013-04-05 21:18:11
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