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western各个条带间有分界线or点是怎么回事
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liusiapril
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western各个条带间有分界线or点是怎么回事
前段时间做western一直没有条带,后经高人指点加大蛋白上样量,就成功的曝出了条带,但是条带之间出现了如小图所示的分界线or点(如小图红色线条标注),身边没有人发生过这种状况,想劳烦见过这种状况或能解释并提出解决办法的同学给予帮助解答,谢谢
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2013-03-30 17:21:26
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【答案】应助回帖
★
liusiapril: 金币+1
2013-04-03 00:08:08
这个问题我也曾经出现过,我当时的解决办法是隔孔点样,
我出现的问题是临孔的大分子蛋白被小分子蛋白带跑了
分析原因可能是临孔的蛋白在电泳时有相互的作用,这个与电泳中的条件可能有一定的关系
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心信其可行,则移山填海之难,终有成功之日;心信其不可行,则反掌折枝之易,亦无收效之期
12楼
2013-04-02 23:10:30
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cicelyzh
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【答案】应助回帖
★
感谢参与,应助指数 +1
liusiapril: 金币+1, 感谢一起找原因分析
2013-03-30 23:53:16
可能是封闭不理想或者是膜洗得不是很好。
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2楼
2013-03-30 23:46:58
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liusiapril
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引用回帖:
2楼
:
Originally posted by
cicelyzh
at 2013-03-30 23:46:58
可能是封闭不理想或者是膜洗得不是很好。
我觉得封闭的原因可以排除。这次因为某些原因,我室温封闭了4个小时。洗膜也挺彻底的啊,一抗后洗是5×8min,二抗后洗是6×8min。
[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼
2013-03-30 23:51:50
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cicelyzh
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【答案】应助回帖
ECL不好了也可能会出现这样的现象。而且这种现象和抗体有关,只是个别抗体偶尔出现这种情况。我觉得你可以检查一下western吸膜的缓冲液pH是不是对,还有就是可以试试封闭过夜。
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4楼
2013-03-31 00:10:50
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