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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western各个条带间有分界线or点是怎么回事
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liusiapril

木虫 (小有名气)

[求助] western各个条带间有分界线or点是怎么回事

前段时间做western一直没有条带，后经高人指点加大蛋白上样量，就成功的曝出了条带，但是条带之间出现了如小图所示的分界线or点（如小图红色线条标注），身边没有人发生过这种状况，想劳烦见过这种状况或能解释并提出解决办法的同学给予帮助解答，谢谢

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1楼 2013-03-30 17:21:26
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

philoshyren

银虫 (初入文坛)
1.封闭不好
2.一抗浓度大
3.上样量高
4.二抗浓度大
5.发光底物比较敏感，可以用一些国产的效价低一点的
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10楼2013-04-02 10:20:42
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liusiapril: 金币+1, 感谢一起找原因分析 2013-03-30 23:53:16
可能是封闭不理想或者是膜洗得不是很好。
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2楼2013-03-30 23:46:58
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liusiapril

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-30 23:46:58
可能是封闭不理想或者是膜洗得不是很好。

我觉得封闭的原因可以排除。这次因为某些原因，我室温封闭了4个小时。洗膜也挺彻底的啊，一抗后洗是5×8min，二抗后洗是6×8min。

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3楼2013-03-30 23:51:50
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

ECL不好了也可能会出现这样的现象。而且这种现象和抗体有关，只是个别抗体偶尔出现这种情况。我觉得你可以检查一下western吸膜的缓冲液pH是不是对，还有就是可以试试封闭过夜。
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4楼2013-03-31 00:10:50
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liusiapril

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-31 00:10:50
ECL不好了也可能会出现这样的现象。而且这种现象和抗体有关，只是个别抗体偶尔出现这种情况。我觉得你可以检查一下western吸膜的缓冲液pH是不是对，还有就是可以试试封闭过夜。

ECL没问题，师姐用着也没这状况。和抗体有关？是一抗还是二抗呢？我有点想不明白这是什么原因。我是一直觉得一抗过夜比较好，所以封闭过夜总觉得浪费了大好的一夜时间…

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5楼2013-03-31 00:29:25
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
liusiapril: 金币+2 2013-03-31 11:08:01
引用回帖:
5楼: Originally posted by liusiapril at 2013-03-31 00:29:25
ECL没问题，师姐用着也没这状况。和抗体有关？是一抗还是二抗呢？我有点想不明白这是什么原因。我是一直觉得一抗过夜比较好，所以封闭过夜总觉得浪费了大好的一夜时间…
...

我觉得是和一抗有关的。即使是有问题的抗体也不是每次都有问题，只是偶尔会出现。所以我觉得是和封闭、洗膜什么的相关。你可以试试重新稀释一下一抗再做做看。
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6楼2013-03-31 05:28:38
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liusiapril

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-31 05:28:38
我觉得是和一抗有关的。即使是有问题的抗体也不是每次都有问题，只是偶尔会出现。所以我觉得是和封闭、洗膜什么的相关。你可以试试重新稀释一下一抗再做做看。...

嗯，再试试。我老大要崩溃了，这一抗用的我都心疼了…

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7楼2013-03-31 11:07:36
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遥控器68

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liusiapril: 金币+1 2013-04-01 19:59:26
为什么跑的跟网格一样啊 会不会一抗用多了，只是猜测。另外，蛋白量多了固然好，但是要适度的，亲
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8楼2013-04-01 10:25:23
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liusiapril

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 遥控器68 at 2013-04-01 10:25:23
为什么跑的跟网格一样啊 会不会一抗用多了，只是猜测。另外，蛋白量多了固然好，但是要适度的，亲

之前蛋白量少了，我一直没做出条带来，这次蛋白量加大了，一抗比例也加大了？这么说来不能太大了？为什么蛋白量大了也不好呢？除了浪费样品还有什么影响啊，谢谢~

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9楼2013-04-01 19:58:41
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