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raindrop_mc

银虫 (小有名气)

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[求助] 大肠杆菌o抗原的检测，总是不出结果，无任何凝集现象，着急啊

我是按照以下实验方法操作的。
一：血清
从中国兽药监察所购置，牛源常见o抗血清14种。用0.5%石碳酸生理盐水进行稀释。
目前稀释1，3，5三个稀释倍数，因为第一次做，还不确定用多大浓度。
二：抗原的制备
将大肠杆菌纯培养物划线接种于麦康凯琼脂平板上，37℃培养18h，在小圆底试管中加入2ml0.5%石碳酸生理盐水，用棉签轻挂下麦康凯琼脂上的培养物，置小圆底试管中，制成浓稠菌液，于121℃高压2h，破坏荚膜（K）抗原，制成高压抗原。
三：检测
取高压锅的洁静玻板，用记号笔划成方格，并注明相应血清标号，每格用微量移液器加一种被检菌高压抗原20ul（上清液）和血清各20ul置玻板上混匀，5min内出现明显凝集者为“阳性”反应。
另外中血清和生理盐水的混合做阴性对照，还有高压抗原和生理盐水的混合，做自凝的对照。

我用此方法，选取了16株从9个厂区采集的大肠杆菌做样本，做了2次试验，均是用血清的原液（就是1倍稀释的）做的，可是一个凝集的结果都没有出现。想了想试验步骤觉得没问题，问了周围的师兄弟也没发现实验步骤有什么不对劲，求解释啊。