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肥猫p木虫 (正式写手)
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[交流]
大家同源重组时同源臂位于ORF之外的2端还是之外之内都行？ 已有2人参与
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大家通过同源重组敲除基因的时候，同源臂一般多大（真菌中or原核中），同源臂是位于ORF之外的2侧还是之外之内无所谓？ 如果是做基因替换，就不能破坏上游的调控序列，因此最好的办法就是正好到起始密码子处，可是由于酶切位点、引物设计等问题，肯定不能这么完美。那么如果在原基因的ORF还残留几十个bp（3 的倍数），再接上新基因的oRF，可以这么干么？是否会不严谨？谢谢大家。欢迎大家讨论。 |
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敲除的话无所谓，一般放在外侧更保险一些吧，这样把编码区完全置换掉。 如果要严格的“替换”，可以用融合PCR构建置换盒，不受酶切位点影响。参见http://www.sciencedirect.com/sci ... i/S1087184504001185 |
3楼2013-03-29 15:56:25